肺滴注固定术:将液体引入气管并固定肺以测量固定肺容积

- 肺滴注用于将物质直接引入气管，以分析患有癌症或其他病症的小鼠肺部。首先，将麻醉的小鼠放在倾斜的插管平台上，剃掉脖子上的毛发。用剪刀在脖子下方做一个小切口，然后用镊子轻轻拉动皮肤，露出气管。通过口腔将导管插入气管，并通过切口观察。将示例液体注入气管，并通过用空注射器引入空气来快速给肺部充气，以正确分配液体。

闭合伤口并将鼠标放入恢复室中。在所需的时期之后，处死鼠标并露出肺部。用固定剂充气以量化总肺活量。将肺放入装有固定剂的管子中。使用阿基米德原理测量固定肺容积。将肺放入水中，然后用有线设备按压。注意被淹没的肺所取代的水的重量。固定左肺中肺体积的分数通常小于体内测量的肺体积。

- 在开始手术之前，手动将 1 英寸长 20 号商用静脉插管的尖端弯曲成轻微弯曲。然后，在通过对脚趾捏无反应确认麻醉后，将药膏涂抹在成年小鼠的眼睛上，并将小鼠仰卧在带有大型办公室活页夹和缝合环的倾斜平台上。剃掉脖子的腹侧部分，并用 70% 的酒精对皮肤进行消毒。然后用锋利的剪刀在颈部做一个小手术切口，在下切牙下方约 12 毫米处。

接下来，使用镊子轻轻拉动颈部尾部的皮肤，直到可以看到气管腹壁。然后轻轻缩回舌头并插入套管，弯曲的尖端向鼠标的腹面倾斜。正如刚才所示，再次轻轻拉动颈部皮肤，将套管插入气管。当可以在气管中观察到导管时，将导管向前推进约 5 毫米以通过声带。

现在将装有 50 微升滴注液的凝胶加载移液管的尖端放入导管的下部轮毂中。确认尖端中液体的运动与鼠标的呼吸同步，然后注入滴注液。使用 1 毫升注射器，立即通过导管向肺部注入 0.6 毫升空气，以帮助将液体分配到肺部深处，然后取出套管。用少量氰基丙烯酸酯粘合剂闭合手术伤口，并将鼠标放在一个单独的笼子里，并有监测，直到它完全恢复。

在最后的实验时间点之后，在动物的脖子上做一个小切口，露出气管的腹侧。然后将 18 号短针尖插入气管。用线将针头扎入气管，然后小心地用中线切口打开胸部。然后切掉横膈膜并去除侧胸壁以露出肺部。接下来，通过在旋塞阀的末端运行甲醛，确保固定管中没有空气。然后将福尔马林储液器和装满的管子直接连接到气管切开针的下端。

将甲醛的顶面置于口腔水平上方 25 厘米处，然后打开旋塞阀，用固定剂给肺部充气。在压力下让肺部至少 20 分钟后，慢慢拉回针头以露出更多未穿环的气管，同时将气管系在短针末端之外。气管系紧后，取下旋塞并小心解剖肺部。然后将肺放入甲醛中过夜。

在这里，显示了一种在固定肺容量期间将肺固定到位的典型装置，该装置由塑料移液管和 20 号细线制成。要测量固定肺容量，首先从肺部解剖心脏和任何其他非肺组织。接下来，将装有约 200 毫升水的烧杯（配有金属丝支撑装置）放在天平上，然后将设备去皮。

然后取下设备，将肺放在水面上，并使用设备将组织压在水下，注意肺、缝合线或设备的任何部分不要接触烧杯的侧面或底部。在天平上记录重量。这个数字反映了排出的水量，因此是肺容量的直接量度。然后在擦拭布上擦干肺，再次用设备去皮烧杯，然后重复肺体积测量。然后应将两个体积测量值取平均值。