XTT检测：一种用于评估细胞活力和线粒体活性的比色法检测

低频超声波可导致人白血病细胞的选择性裂解，XTT 检测有助于确定这种损伤的程度。该检测的原理是健康细胞的线粒体酶可将黄色 XTT 染料转化为一种橙色化合物，称为甲臜。开始检测时，先用甲基-β-环糊精（一种耗竭胆固醇的试剂）处理细胞，随后以低功率对细胞进行超声处理以诱导细胞损伤。

离心以沉淀细胞，并向沉淀中加入新鲜的细胞培养基。将细胞以所需浓度接种至多孔微孔板中，过夜培养。随后，向细胞中加入活化的XTT溶液，孵育至微孔板各孔中出现橙色。将微孔板放入分光光度计中，在450至500纳米波长下测定吸光度，然后在630至690纳米波长下再次测定吸光度。将两个数值相减，以获得精确结果。XTT实验中较高的吸光度值表明线粒体酶活性更高，细胞活力更强。

在以下视频中，我们将演示如何使用XTT检测法来评估低频超声波对经甲基-β-环糊精处理的白血病细胞造成损伤的效力。

－为了通过XTT法检测超声处理后细胞的存活率，使用1至3次、每次1秒、间隔1秒的超声脉冲处理细胞，以产生不同程度的损伤，供XTT试剂盒进行评估。随后离心收集细胞，并将细胞沉淀重悬于新鲜配制的培养基中，调整浓度为每毫升1×10⁵个细胞。接下来，将100微升细胞悬液接种至96孔平底微孔板中，每孔一份，每个样本设三个复孔；同时设置三个对照孔，每孔加入100微升完全培养基（不含细胞），用于空白吸光度读数。将细胞在培养箱中孵育24小时。

在检测当天早晨，轻轻摇动已预热至37摄氏度的XTT试剂和活化试剂的等分试样，直至溶液澄清。然后将0.1毫升活化试剂加入5毫升XTT试剂中。接着，将50微升活化的XTT溶液加入接种了U937和THP1细胞的各孔板中，并将细胞放回细胞培养箱中继续孵育。两小时后，轻轻振荡孔板，使阳性孔中的橙色染料均匀分布，并在酶标仪上测定450至500纳米波长范围内的吸光度。最后，再次测定所有检测孔在630至690纳米波长范围内的吸光度。