白血病细胞与骨髓基质细胞的二维共培养：一种获取白血病细胞亚群的方法

在二维共培养体系中，多种细胞类型共同生长于平底培养板中。该培养体系有助于在体外研究细胞间的相互作用与行为。为建立白血病细胞与骨髓基质细胞（BMSCs）的共培养体系，需将白血病细胞悬液加入已贴壁生长的BMSC单层培养物中。在适当的培养条件下孵育培养板。每四天更换90%的培养基以维持共培养体系。

在此二维共培养过程中，白血病细胞与骨髓间充质干细胞（BMSCs）相互作用，并在培养体系中定位于不同的区域，形成三个亚群。通过相差显微镜可直观区分这三个亚群。第一类白血病细胞呈游离悬浮于培养基中，被归类为悬浮细胞。第二类白血病细胞已黏附于BMSC单层表面，呈现明亮形态，被归类为相位明亮细胞。

第三类迁移至单层下方的白血病细胞呈现暗淡状态，被归类为相位暗细胞。在以下方案中，我们将急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞与人骨髓基质细胞进行共培养。

— 首先，将5至20乘以10的6次方个白血病细胞接种于10毫升肿瘤特异性培养基中，加入至含有80%至90%融合度的骨髓基质细胞或成骨细胞的100毫米培养皿中。每第四天，将培养皿倾斜，吸除除1毫升外的所有培养基，注意不要扰动贴壁细胞层。然后，沿培养皿侧壁的角落，逐滴小心加入9毫升新鲜的白血病细胞培养基，以最大程度减少对贴壁细胞的干扰。

共培养第12天后，轻轻将培养基在培养板中上下吹打约5至10次，以收集悬浮的白血病细胞，并将细胞转移至15毫升锥形管中。然后，如前所述，将细胞重新接种到一个新的培养板上，该培养板含有80%至90%融合度的骨髓基质细胞或成骨细胞。到第4天时，将形成三类白血病细胞亚群：悬浮的白血病细胞自由漂浮于培养基中，相位明亮的白血病细胞贴附于贴壁细胞单层表面，而相位暗淡的白血病细胞则迁移至单层下方。