眶后血液采样:一种从小鼠眶后窦中分离单核细胞的方法

0 次观看3:18 分钟 • April 30th, 2023

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- 首先,握住麻醉小鼠的脖子并突出眼睛。将细毛细管插入眼睛的内眦。让血液通过毛细管作用流入试管。将血液转移到涂有 EDTA 的试管中,并保持在冰上。EDTA 结合钙离子,防止血液凝固。较低的温度会降低细胞的糖酵解活性和微生物污染的机会。

接下来,用含有 EDTA 的缓冲液稀释血液并充分混合。小心地在底部添加一层适当的分离溶液,不要干扰血液。离心悬浮液。分离溶液中的聚合物将红细胞和沉积物聚集在底部。单核细胞和血小板比聚合物轻,沉积在聚合物梯度上方。

去除含有血浆的顶层,并收集含有单核细胞的不透明白色环。使用 PBS 稀释细胞并离心以去除残留的血浆和血小板。使用分离的单核细胞进行进一步分析。以下方案将演示从注射白血病细胞系 C1498 的同源小鼠中分离单核细胞。

- 将毛细管插入麻醉白血病动物眼睛的内眦。将从眶窦抽取 100 至 200 微升血液进入毛细管。取下管子,将无菌纱布海绵轻轻涂抹在眼睛上以控制出血。然后,将血液转移到 EDTA 管中,并将管子储存在冰上,直到单核细胞分离。

为了分离血液单核细胞,首先添加补充有 1 毫摩尔 EDTA 的 PBS,最终体积为 500 微升。然后,将样品转移到微量离心管中。接下来,使用配备 1 号针头的 30 毫升注射器小心地将 500 微升分离溶液置于血液下,注意不要混合各层。

通过离心分离细胞,并使用移液器将不透明的白色单核细胞层转移到新的微量离心管中。然后在 1 毫升 PBS 中洗涤免疫细胞。将它们离心并将沉淀重悬于 600 微升 FACS 缓冲液中,用于染色和流式细胞术分析。

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最后更新:1 八月 2026