骨髓来源的树突状细胞生成:一种从小鼠骨髓生成树突状细胞的方法

- 树突状细胞或 DC 是激活 T 细胞的关键抗原呈递细胞。在白血病患者中，这些细胞对肿瘤相关抗原的表达不佳，无法引发抗原特异性免疫反应。树突状细胞在骨髓中丰富。因此，骨髓是它们分离的首选部位，以帮助研究它们在癌症中的作用。

为了获得树突状细胞，使用充满培养基的注射器从安乐死小鼠的股骨或胫骨中提取骨髓将其冲洗出来。离心并将沉淀重悬于氯化铵钾或 ACK 缓冲液中以裂解红细胞。现在添加培养基以停止裂解并离心。将沉淀重悬于含有抗生素的培养基中。加入粒细胞 - 巨噬细胞集落刺激因子或 GM-CSF，并将细胞悬液转移到培养皿中。

将板孵育所需的持续时间。GM-CSF 帮助祖细胞分化为树突状细胞。最后，用脂多糖或 LPS 激活细胞，脂多糖或 LPS 与树突状细胞的表面受体结合，产生完全成熟和免疫原性的骨髓树突状细胞。在该协议中，我们将演示从小鼠骨髓产生树突状细胞。

- 为了生成骨髓来源的树突状细胞，如图所示，从野生型或因子 B 敲除小鼠的股骨中分离骨髓，并在 5 毫升 ACK 裂解缓冲液中裂解红细胞，5 分钟后用 10 毫升补充 1% FBS 的 RPMI 终止反应。

通过离心收集全血细胞后，将沉淀重悬于 10 毫升培养基中，达到每毫升 6 个细胞浓度的 2 乘以 10，并向细胞中加入 20 ng/mL/ml GM-CSF，然后将 10 mL 细胞接种到单个 100 x 15 毫米培养皿上，在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下接种 6 天。第六天，用每板 25 微克/毫升 LPS 激活骨髓来源的树突状细胞培养物。