0 次观看 • 3:31 分钟 • April 30th, 2023
— 有时，干细胞或祖细胞会发生突变，从而产生白血病干细胞。在这些细胞中，某些蛋白质的表达会上调，针对这些蛋白质使用抗癌化合物有助于控制细胞的增殖。通过监测集落形成单位（CFU）实验中形成的集落数量和大小，可以分析这些抗癌化合物的作用效果。
首先从白血病小鼠中获取前体细胞，并将其稀释于适当的培养基中。将该细胞悬液与相应的抗癌化合物一同加入含有小鼠特异性细胞因子的甲基纤维素中，然后倒入培养皿内。孵育该混合物直至克隆集落出现。甲基纤维素是一种化学惰性的半固体基质，可防止细胞迁移，而细胞因子则促进前体细胞分化，形成包含可识别子代细胞的克隆集落。
接着，使用碘硝基四唑氯化物（INT）对菌落进行染色，并过夜培养，直至菌落变为深红褐色。线粒体酶将黄色的INT还原为红褐色的甲臜染料。最后，鉴定并计数平板上存在的菌落。在接下来的实验方案中，我们将进行菌落形成单位（CFU）实验，以检测抗癌化合物对YFP阳性细胞的作用。
- 首先，在室温下解冻含细胞因子的小鼠甲基纤维素。然后 分装 3 毫升甲基纤维素置于 FACS 管中。向 3 毫升甲基纤维素中加入含有适当抑制剂的 100 微升细胞悬液。随后在高速下涡旋振荡悬液 10 至 30 秒。
待大部分气泡逸出后，用1毫升注射器取1毫升培养基，分种于三个重复的培养皿中。将培养皿放入一个较大的培养皿内，同时放入一个盛有无菌水的敞口培养皿。然后盖上大培养皿的盖子，在37°C条件下培养细胞。
通过将10毫克碘硝基四氮唑氯化物溶解于10毫升水中，制备碘硝基四氮唑氯化物染色液。使用配备0.2微米滤器的鲁尔锁式注射器对染色液进行过滤除菌。
在组织培养超净台中，将100微升染色液逐滴加入CFU平板周围。然后将平板置于细胞培养孵箱中，37摄氏度孵育过夜。最后，待菌落呈现深红棕色后，在无菌组织培养超净台中使用白色背景对染色后的CFU平板进行拍照。