阴性免疫磁性选择:一种从外周血单核细胞中纯化 B 细胞的方法

0 次观看3:06 分钟 • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

外周血单核细胞或 PBMC 包括 B 细胞、T 细胞、自然杀伤细胞或 NK 细胞以及单核细胞。B 细胞产生免疫球蛋白分子来抵抗感染。在白血病中,这些细胞繁殖并转移到不同的器官。

要分离 B 细胞,请从分离的 PBMC 的悬浮液开始。添加针对特定细胞表面分子的一抗混合物,称为分化簇或 CD。特异性抗体与 T 细胞上的 CD-3 分子、单核细胞上的 CD-14 分子和 NK 细胞上的 CD-16 分子结合,而 B 细胞未标记。

接下来,洗涤样品以去除未结合的抗体。向样品中加入二抗偶联的磁性微珠。二抗与附着在特定细胞上的一抗的 FC 区结合。将含有标记细胞悬液的试管置于磁场的影响下。在磁场中,磁性标记的细胞迁移并结合到管壁上,导致不需要的细胞出现负选择。将含有富集 B 细胞的上清液收集到新的收集管中。

在该协议中,我们将对来自慢性淋巴细胞白血病患者的 PBMC 的白血病 B 细胞进行阴性免疫磁性选择。

弃去上清液,将 1000 万个 PBMC 重悬于一毫升分离缓冲液中,即含有 0.1% BSA 和 2 毫摩尔 EDTA 的 PBS,pH 值调节至 7.4。现在需要从 PBMC 制剂中纯化 CLL 淋巴细胞。然后,加入 10 μg 小鼠单克隆抗 CD-3、CD-14 和 CD-16 一抗,并在 4 摄氏度下孵育 30 分钟。

用分离缓冲液洗涤细胞并在 4 °C 下以 500 倍 g 离心 5 分钟后,将 1000 万个 PBMC 重悬于 1 mL 分离缓冲液中。将重悬的细胞与 100 μL 洗涤的磁珠在 4 摄氏度下孵育 30 分钟,然后轻轻重悬。然后,将试管放入磁力架中 2 分钟,并使用 5 mL 移液管将上清液和未结合的细胞转移到新试管中。完成此步骤后,纯化的 CLL 淋巴细胞即可使用。

07:28

功能研究和过继转移实验小鼠骨髓嗜中性粒细胞的分离,纯化及贴标

相关视频

0 观看次数

09:25

检测和罕见富集抗原特异性B细胞的表型和功能分析

相关视频

0 观看次数

09:13

原人类单核细胞的隔离、转染和文化

相关视频

0 观看次数

04:27

通过免疫磁性阴性选择从全血中分离单核细胞

相关视频

0 观看次数

02:45

从人血沉棕黄层中分离外周血单核细胞

相关视频

0 观看次数

03:58

从人外周血中分离和纯化 B 细胞

相关视频

0 观看次数

14:06

从脐带血分离的前体B细胞亚群

相关视频

0 观看次数

08:26

的分离,分化和人类的定量分泌抗体的B细胞从血液:酶联免疫斑点作为体液免疫的功能读出

相关视频

0 观看次数

08:08

分离及小鼠淋巴细胞的激活

相关视频

0 观看次数

09:08

从Sézary综合征患者中分离人外周血单核细胞和CD4 + T细胞以进行转录组学分析

相关视频

0 观看次数

最后更新:1 八月 2026