移植胰岛:一种将胰岛植入小鼠眼前房进行体内成像的方法

- 胰岛含有分泌胰岛素的 β 细胞。在 1 型糖尿病患者中，制造胰岛素的 β 细胞功能失调。此类患者的胰岛移植具有控制血糖的潜力。为了评估移植效率，我们使用动物模型，例如小鼠，其前眼房是移植和体内成像的最佳部位。

对于移植胰岛，将麻醉的小鼠放在温暖的加热垫上，并在小鼠背部皮下注射丁丙诺啡，一种缓解疼痛的镇痛剂。接下来，将小鼠的鼻子插入鼻罩中，以持续供应氧气和麻醉剂异氟醚。

将鼠标的头部固定在头部支架中，露出眼睛，然后用钝镊子轻轻缩回眼睑，将眼睛弹出。用荧光标记的胰岛加载套管。将套管的半尖端插入角膜。提起角膜，轻轻分配胰岛，取出套管，然后涂抹眼胶。

在所需的持续时间后，将鼠标放在双光子显微镜下并拍摄图像。您可能会观察到血管在整个移植物中形成微血管网络。在以下方案中，我们将进行人胰岛移植到小鼠的前眼房中。

首先，将鼠标放在温暖的加热垫上，将其放在头架上，然后戴上鼻罩。用拇指和食指轻轻抬起头部。用侧面的金属件固定它，确保听筒将头部固定在耳朵正下方。皮下注射丁丙诺啡溶液到小鼠的背部。使用钝钳轻轻地缩回要移植的眼睑。弹出眼睛，然后用一把覆盖有聚乙烯管的镊子松散地固定它。

将胰岛转移到含 PBS 的培养皿中后，在眼套管中拾取大约 20 至 30 个胰岛。使用 25 号针头向上斜面，小心地将尖端插入角膜并做一个横向切口。小心地提起角膜，套管预装了胰岛，然后慢慢将胰岛释放到眼睛中。慢慢缩回套管并将眼部凝胶涂抹在眼睛上。

10 分钟后，取下固定眼睑的镊子，将眼睛放回正常位置。对于使用双光子显微镜对植入的人类胰岛进行成像，将头架平台置于显微镜下，并将眼凝胶作为角膜和晶状体之间的浸没液施用到眼睛上。将眼睛放在物镜下方，并按照文本手稿中的描述对植入的人类胰岛进行成像。