原代腺泡细胞分离：从小鼠胰腺中分离腺泡细胞的方法

胰腺腺泡细胞是一种外分泌细胞，含有多种消化酶。有时，在致癌信号的刺激下，腺泡细胞会转化为导管细胞。这种导管细胞随后可能发展为癌细胞。因此，分离腺泡细胞以研究其在胰腺癌进展中的作用至关重要。

首先，从安乐死的小鼠体内分离出胰腺。将胰腺放入含有平衡盐溶液（添加抗生素）的称重皿中。使用剪刀将胰腺剪成小块，并将胰腺组织转移至离心管中。接着，向离心管中的胰腺组织块加入胶原酶溶液。

胶原酶可消化将组织结合在一起的胶原蛋白，从而使组织分解成细小碎片。现在向离心管中加入含血清的培养基，并将组织置于冰上。这有助于终止胶原酶的作用。

依次使用孔径逐渐减小的滤网对组织和培养基进行两次过滤，以获得细小的组织悬液。最后，离心所得悬液，使腺泡细胞沉淀收集于管底。弃去上清液，将腺泡细胞沉淀保存用于后续分析。在以下实验方案中，我们将从安乐死小鼠的胰腺中分离腺泡细胞。

— 要从已处死的小鼠中分离胰腺，首先将小鼠的四肢用大头针固定在聚苯乙烯盖子上，使其尾部朝向操作者，然后用70%乙醇喷洒腹部。使用已灭菌的镊子提起腹部中线处的毛发和皮肤，再用已灭菌的剪刀从尿道开口处向横膈膜-肋骨区域剪开皮肤和毛发。接着分别向左、右两侧做附加切口，以去除皮肤和毛发，从而清晰暴露腹腔。

然后，沿中线并向左右两侧剪开腹膜，将其从器官上剥离。用镊子提起肠管并将其移至小鼠左侧，以暴露与深红色椭圆形脾脏相连的浅粉色胰腺。胰腺组织质地柔软，呈海绵状。剪下沿胃部走行并与肠管交织的胰腺组织。

将脾脏与胰腺分离，将胰腺置于含有10毫升含1X青霉素-链霉素的HBSS的50毫升离心管中，并转移至超净工作台。将管中内容物倒入一个空的称量皿中，用镊子夹住胰腺旋转冲洗。然后用镊子将胰腺转移至第二个含有含青霉素-链霉素HBSS的称量皿中，再次通过旋转进行清洗。

将胰腺转移至第三个含有青霉素-链霉素的HBSS称重皿中，并开始将胰腺切成5毫米或更小的组织块。将称重皿中的内容物倒入一个新的50毫升离心管时，首先用镊子在倾倒过程中将胰腺组织块移入液体中。待组织块完全脱离称重皿后，将皿内液体倒入离心管。用镊子拾取残留的组织块，并在离心管中冲洗镊子。

在4摄氏度下以931倍重力离心2分钟后，使用5毫升移液管去除HBSS及任何漂浮的脂肪组织。加入5毫升用HBSS稀释的胶原酶。盖紧管盖，并用塑料石蜡膜包裹管口以确保密封。将管子放入37摄氏度、220转/分钟振荡的培养箱中孵育20分钟，此时将得到浑浊的溶液且仅残留少量组织碎片。

为终止解离过程，将离心管置于冰上，并加入 5 毫升含 5% FBS 的冷 HBSS。在 4 摄氏度下以 931 ×g 离心 2 分钟后，使用 5 毫升移液器移除上清液。用 10 毫升含 5% FBS 的 HBSS 重悬沉淀物，并在 4 摄氏度下再次以 931 ×g 离心 2 分钟。

使用5毫升移液管吸除上清液，并用另一份10毫升含5% FBS的HBSS重复此步骤。然后将沉淀重悬于5毫升含5% FBS的HBSS中。使用P1000移液器将细胞悬液逐1毫升通过500微米滤网过滤至50毫升离心管中。

为将残留的胰腺细胞通过滤网冲洗，加入额外的5毫升含5% FBS的HBSS。然后使用P1000移液器将滤液每次1毫升反复通过105微米滤网，收集至50毫升离心管中。轻柔地将该细胞悬液转移至含有含30% FBS的HBSS的50毫升离心管中，从而在上层形成细胞悬液层。

将该细胞悬液在 4 摄氏度下以 233 ×g 离心 2 分钟，弃去上清液。用 1× Waymouth 完全培养基重新悬浮含有腺泡细胞的沉淀。