原代腺泡细胞分离:一种从小鼠胰腺中分离腺泡细胞的方法

- 胰腺腺泡细胞是一种含有多种消化酶的外分泌细胞。有时，为了响应致癌信号传导，腺泡细胞转化为导管细胞。这种导管细胞稍后会癌变。因此，分离腺泡细胞以研究它们在胰腺癌进展中的作用至关重要。

首先从安乐死的小鼠中分离胰腺。将胰腺加入装有平衡盐溶液并补充抗生素的称重舟中。用剪刀将胰腺切成小块，然后将胰腺组织加入试管中。接下来，将胶原酶溶液添加到管中的胰腺碎片中。

胶原酶消化将组织固定在一起的胶原蛋白，使组织分解成细小的碎片。现在，将含血清的培养基添加到试管中，并将组织置于冰上。这有助于停止胶原酶的作用。

过滤组织和培养基两次，每次逐渐减小过滤器的网孔尺寸以获得精细的组织悬浮液。最后，离心所得悬浮液以收集沉淀中的腺泡细胞。去除上清液并储存腺泡细胞以供进一步分析。在以下方案中，我们将从安乐死小鼠的胰腺中分离腺泡细胞。

- 要从安乐死的小鼠中解剖胰腺，首先将小鼠的爪子固定在聚苯乙烯盖上，调整其方向，使尾巴面向研究人员，然后用 70% 乙醇喷洒腹部。使用高压灭菌的镊子提起中线处的毛皮和皮肤，然后用高压灭菌的剪刀，从尿道开口到横膈膜-肋骨区域，在毛皮和皮肤上做一个切口。在左侧和右侧做额外的切口，切掉皮毛和皮肤，从而清楚地看到腹腔。

然后，从中间和左右切开腹膜内膜，并将其从器官中拉出。使用镊子提起肠道并将其移动到鼠标的左侧，创造空间可以看到附着在深红色椭圆形脾脏上的浅粉色胰腺。胰腺组织将具有柔软的海绵状质地。切掉胰腺，胰腺沿着胃部延伸，与肠道交织在一起。

将脾脏与胰腺分开，将胰腺放入含有 10 毫升 HBSS 和 1X 青霉素-链霉素的 50 毫升试管中，并将其转移到层流罩中。将管子的内容物倒入空的称重船中，用镊子旋转清洗胰腺。然后使用镊子将胰腺移动到第二个装有 HBSS 和青霉素 - 链霉素的称重船上，并通过旋转再次洗涤。

将胰腺移至含有青霉素-链霉素的 HBSS 的第三个称重船，然后开始将胰腺切成 5 毫米或更小的块。要将称量船的内容物倒入新的 50 毫升试管中，首先在船倾翻时使用镊子将胰腺碎片移入液体中。一旦碎片不再连接到船上，将其内容物倒入管中。用镊子捡起任何剩余的碎片，并在试管中清洗镊子。

4 摄氏度下以 931 倍重力离心试管 2 分钟后，使用 5 毫升移液器去除 HBSS 和任何漂浮脂肪。加入 5 毫升用 HBSS 稀释的胶原酶。关闭试管，并用塑料石蜡膜包裹试管以确保盖子密封。将其放入培养箱中，在 220 摄氏度下以 37 RPM 摇动 20 分钟，这将产生浑浊的溶液和少量残留的组织碎片。

为了停止解离，将试管放在冰上并加入 5 毫升含 5% FBS 的冷 HBSS。在 4 摄氏度下以 931 倍重力离心 2 分钟后，使用 5 mL 移液管去除上清液。将沉淀重悬于 10 毫升含 5% FBS 的 HBSS 中，并在 4 摄氏度下以 931 倍重力再次离心 2 分钟。

使用 5 毫升移液管去除上清液，然后用另外 10 毫升含 5% FBS 的 HBSS 重复此步骤。然后将沉淀重悬于 5 毫升含 5% FBS 的 HBSS 中。使用 P1000 移液器通过 500 微米网孔将细胞悬液一次过滤 1 毫升，放入 50 毫升试管中。

要通过网片洗涤任何剩余的胰腺细胞，请额外添加 5 毫升含 5% FBS 的 HBSS。然后使用 P1000 移液器将滤液一次 1 毫升，通过 105 微米的网孔，进入 50 毫升的试管中。轻轻地将这种细胞悬液移液到含有 30% FBS 的 HBSS 的 50 毫升试管中，这将在顶部形成一层细胞悬液。

4 摄氏度下以 233 倍重力离心该细胞悬液 2 分钟，然后去除上清液。将含有腺泡细胞的沉淀重悬于 1X Waymouth 完全培养基中。