腺泡-导管化生诱导：一种在三维离体培养中研究腺泡细胞向导管细胞分化的实验方法

胰腺的外分泌部分由腺泡细胞和导管细胞组成。腺泡细胞合成并将其消化酶分泌到管腔中。导管细胞排列在输送这些酶至小肠的管道内壁。为了适应遗传和环境压力，腺泡细胞会发生形态和功能上的转变，转化为类似导管的细胞，这一过程称为腺泡-导管转分化（acinar-to-ductal metaplasia，ADM）。

有时，腺泡细胞向导管样细胞转分化（ADM）可能导致胰腺癌的发生。为在体外诱导 ADM，将原代腺泡细胞与保持在冰上的胶原凝胶混合，制备冷的胶原细胞悬液，以防止基质凝固。用感兴趣的 ADM 刺激剂或抑制剂处理该悬液。

将悬液分装至培养板中，孵育以促进胶原凝固，使细胞包埋其中。随后，用移液器在已凝固的胶原细胞层上方加入含有待测ADM刺激剂或抑制剂的额外培养基。

将培养板孵育适当的时间。在腺泡-导管化生诱导过程中，呈锥体形的原代腺泡细胞会转分化为具有导管细胞样形态的细胞。在以下实验方案中，我们将展示使用TGFα作为刺激因子，在原代小鼠腺泡细胞中进行腺泡-导管化生的体外诱导。

— 制备胶原凝胶时，将7毫升I型大鼠尾胶原、700微升10倍浓度的Waymouth培养基和466.6微升0.34摩尔的氢氧化钠加入50毫升离心管中，置于冰上混合均匀，制得胶原凝胶。将细胞悬液与胶原凝胶在3小时孵育后按等体积混合，并轻轻混匀。将2,000微升混合液逐孔加入六孔板中，加样过程中保持培养板置于冰上，并轻轻摇晃以使胶原-细胞层均匀分布。

为使培养基凝固，将培养板置于37摄氏度、5%二氧化碳的细胞培养箱中孵育30分钟。随后每孔加入1.5毫升含所需刺激物或抑制剂的1倍浓度Wymouth完全培养基。

次日更换培养基，之后每隔一天更换一次。根据所使用的刺激因素，可在第3至第5天之间观察到腺泡-导管化生（acinar-to-ductal metaplasia，ADM）。