荧光正位小鼠模型：将表达GFP的癌细胞植入小鼠体内以评估肿瘤在体内的进展

- 表达绿色荧光蛋白（GFP）的癌细胞可通过无创光学成像技术监测肿瘤的生长和转移。我们通常将这些细胞植入原位模型中，以重建肿瘤微环境，并模拟肿瘤细胞与其周围环境的相互作用。

首先将一只已麻醉的小鼠置于温暖的加热垫上。接着，将其鼻子插入鼻罩以供给氧气和异氟烷（一种麻醉剂）。使用剪刀做一个小切口并剪开组织。轻柔地将脾脏连同胰腺一起拉出，并找到胰腺尾部。

用注射器吸取荧光标记的癌细胞悬液，轻轻将其注射到胰腺尾部。注射部位出现浅表气泡，表明植入成功。将器官放回体腔，并使用无菌缝线闭合切口。现在，将小鼠放回笼中，并在其恢复期间进行监测。

在达到所需时间后，将小鼠放入成像室并采集图像。光束照射到癌细胞上，激发GFP，从而产生绿色荧光。在以下实验方案中，我们将对表达GFP的胰腺癌细胞进行手术植入，建立原位小鼠模型。

植入细胞时，首先将软膏涂抹于麻醉小鼠的眼睛，并将动物置于覆盖无菌布的加热垫上。然后，用三次碘伏擦拭 followed by 三次70%乙醇冲洗，轻轻消毒动物的侧腹部。在确认脚趾捏压无反应后，将约200 µL制备好的细胞悬液吸入一支预冷的1 mL结核菌素注射器中，该注射器配备18号针头。

将18号针头更换为27号针头，并将细胞放回冰上。然后，定位腹部左上象限中脾脏的大致位置。用镊子夹住脾脏上方的皮肤，做一个约1厘米长的切口以形成一个袋状开口。接着，夹住脾脏表面的平滑肌，切开组织以进入腹膜腔。

接下来，轻轻抓住脾脏的尾端，将其从体腔中拉出。使用湿润的无菌棉签，将附着在脾脏末端的胰腺组织展开，以定位胰腺尾部。将50微升细胞悬液注入胰腺尾部。然后，缓慢地将针头从胰腺中旋转退出。

成功的植入应表现为一个表浅的水泡，且无任何渗漏。将器官复位至腹腔内，并用肌肉和皮肤包裹所有组织。然后使用6-0缝线关闭切口。术后，对动物注射酮洛芬，并持续监测直至其完全恢复。在适当的实验时间点，使用商用小动物成像系统，在麻醉状态下对活体动物进行肿瘤生长成像，并选择合适的激发和发射滤光片。

接下来，仅使用白光获取初始图像。保持动物位置不变，切换至GFP滤光片并获取第二幅图像。为分析肿瘤生长情况，将白光图像与荧光图像叠加，以评估肿瘤细胞的荧光区域和荧光强度。