0 次观看 • 3:14 分钟 • April 30th, 2023
— 胰腺癌干细胞（CSCs）是一类具有自我更新能力的癌细胞亚群，能够产生整个肿瘤。CSCs 存在于一个受到良好保护的微环境中，该微环境由其他细胞组成，例如成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞以及细胞外基质成分，如细胞因子和生长因子。在这种环境中，细胞之间的相互作用有助于 CSCs 的增殖并促进肿瘤生长。
为了研究肿瘤干细胞（CSCs）的特性，我们从胰腺肿瘤中分离这些细胞。首先，将来源于人胰腺肿瘤组织的细胞悬液置于CSC生长培养基中。接着，将主要含有成纤维细胞和CSCs的细胞悬液接种到明胶包被的培养板上，并根据需要孵育一定时间。成纤维细胞会黏附于明胶表面，而肿瘤干细胞则保持悬浮状态，存在于细胞悬液中。
取少量细胞悬液并加入台盼蓝。将此混合液用移液器转移至血细胞计数板，计数活细胞数量。台盼蓝可进入死细胞并将其染成蓝色，而活细胞则不着色。最后，将肿瘤干细胞（CSCs）储存以用于后续分析。
在以下实验方案中，我们将从胰腺肿瘤中分离出肿瘤干细胞（CSCs）。
— 在无菌生物安全柜中，使用无菌手术刀和镊子将人源肿瘤组织置于含有1毫升无菌PBS的60 × 15毫米培养皿中进行剪碎，必要时再加入3至4毫升PBS，直至组织完全解离，以分离胰腺导管腺癌中的肿瘤干细胞。
将组织悬液转移至无菌的锥形管中，并加入PBS，使最终体积达到5毫升。随后，使用解离仪对样本进行机械匀浆，离心，并在37摄氏度下用胶原酶消化匀浆后的组织。
孵育一小时后，离心收集细胞，并将沉淀重悬于10毫升完全培养基中。用40微米细胞筛过滤细胞悬液，再次离心收集细胞，此次将沉淀重悬于5毫升ACK裂解液中。
室温孵育5分钟后，通过离心去除红细胞裂解缓冲液，并将沉淀重悬于肿瘤干细胞培养基中。随后，将细胞接种于明胶包被的培养皿中，在37°C条件下孵育，以去除大多数快速贴壁的成纤维细胞。1小时后，收集上清液，并定量有活力的胰腺癌细胞数量。