粪便微生物 DNA 分离:研究环境富集对小鼠肿瘤模型中微生物组多样性的影响

0 views • 3:46 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- 环境富集 (EE) 是指修改住房参数以获得对癌症等各种疾病的有益影响。在荷瘤小鼠中,EE 激活免疫系统并减少炎症,最终改善肠道菌群并提高存活率。为了研究肠道微生物群的变化,在含有小鼠粪便的试管中加入所需量的粪便裂解缓冲液。

离心样品并将上清液转移到新鲜的微量离心管中。添加使 DNase 和 RNase 变性的氯化胍裂解缓冲液。接下来,加入乙醇并将样品转移到硅胶离心柱中。

乙醇有助于 DNA 与二氧化硅结合。离心样品。现在,将色谱柱转移到新鲜的微量离心管中,并向色谱柱中加入洗脱缓冲液以洗脱 DNA。

离心样品并丢弃色谱柱。将样品转移到 PCR 管中,运行 PCR 以扩增 DNA。将 DNA 上样到琼脂糖凝胶上并进行电泳以定量微生物 DNA 的大小。在下面的方案中,我们将从粪便中分离 DNA,以分析 EE 对致瘤小鼠结肠微生物群的影响。

- 按照粪便病原体检测方案,使用市售试剂盒从粪便中分离微生物 DNA。这样做时,将样品从零下 80 摄氏度的冰箱中转移到干冰上并称重。接下来,按照文本方案中的说明设置扩增微生物 DNA 的 PCR。然后,使用磁珠净化反应产物。

对于纯化,首先,短暂离心扩增子 PCR 板以拉出反应产物。接下来,涡旋磁珠以均匀分散它们,并将 20 微升等分试样转移到每个反应孔中。通过缓慢移液整个体积 10 次,将珠子与溶液彻底混合。然后,让珠子静置 5 分钟。

接下来,将 PCR 板放在磁力架上,等待 2 分钟,让磁珠收集后上清液透明。然后,去除并丢弃上清液。接下来,将板仍然放在磁铁上,用 200 微升新鲜的 80% 乙醇填充每个珠子孔,并等待 30 秒。然后,小心地去除上清液。

重复此洗涤步骤一次,让珠子风干 10 分钟。现在,通过从磁力架上取下板并向每个孔中加入 52.5 μL Tris 来洗脱珠子中的反应产物。通过缓慢移液整个体积 10 次,将珠子完全混合到溶液中。然后,像以前一样在磁力架上收集珠子,并将 50 微升上清液转移到干净的 PCR 板中。用透明粘合剂盖住板子,并在零下 20 摄氏度下存放长达一周。

06:50

该拼图方块的使用作为评价环境富集的功效的一种手段

Related Videos

0 Views

09:30

在丰富环境的协议房屋小鼠

Related Videos

0 Views

07:02

提供有意义的环境富集和测量唾液皮质醇在猪安置在板状地板

Related Videos

0 Views

09:01

新的治疗肠道病变的疗效,使用活体小鼠的串行内镜成像的非侵入性评估

Related Videos

0 Views

08:14

一种确定环境富集对小鼠结肠肿瘤模型结肠菌群生物多样性影响的方法

Related Videos

0 Views

08:32

肿瘤免疫和非免疫微环境在小鼠皮下肿瘤中的富集与鉴定

Related Videos

0 Views

11:22

使用两步PCR和下一代16S rRNA基因测序进行微生物群分析

Related Videos

0 Views

05:28

使用简单、经济高效的DNA分离方法分析狼疮易发小鼠的粪便微生物群动力学

Related Videos

0 Views

07:32

小鼠粪便分离和微生物群移植

Related Videos

0 Views

07:45

用于人粪便移植到无菌小鼠体内的生物排斥 IsoPositive 笼实验的制备和维持

Related Videos

0 Views

Last updated: 25 July 2026