自发性转移小鼠模型：研究原位注射结直肠癌细胞转移潜能的平台

— 从表达绿色荧光蛋白（GFP）的结直肠癌类器官培养物开始。收集类器官，用细胞解离酶溶液处理，将类器官解离为单细胞悬液。离心以分离含酶的上清液，弃去上清液。使用含有人工细胞外基质的培养基重悬表达GFP的结直肠癌细胞。将细胞悬液装入注射器中，并置于冰上保存，以防止基质在室温下发生凝固。

接下来，将一只麻醉后的小鼠置于仰卧位。轻柔地通过肛门开口将直肠的黏膜层拉出。随后，将制备好的表达GFP的癌细胞悬液注射到含有血管网络的直肠黏膜下层。让小鼠恢复。

数天内，注射部位会形成表达GFP的原发性肿瘤。在发生自发性转移时，这些肿瘤细胞脱落并进入循环系统。最终，细胞迁移至远端器官并增殖，形成GFP阳性的转移性肿瘤。在以下实验方案中，我们将展示通过原位注射表达GFP的结直肠类器官细胞，建立结直肠癌自发性转移小鼠模型的方法。

— 为建立结直肠癌患者来源肿瘤异种移植的自发转移小鼠模型，按前述方法将表达GFP标记的类器官进行解离，并将单细胞肿瘤悬液稀释至每50 µL PBS中含5 × 10⁵个肿瘤细胞，PBS中添加50%人工细胞外基质。将每只小鼠接种50 µL细胞悬液装入配备22号针头的注射器中，并将细胞悬液置于冰上保存。

接下来，确认小鼠对脚趾夹捏无反应，将第一只麻醉后的 NOG 小鼠仰卧置于实验台面上。使用无菌镊子轻轻将直肠黏膜从肛门拉出，立即向直肠黏膜下层注射肿瘤细胞。