0 次观看 • 3:24 分钟 • April 30th, 2023
— 微转移灶是一小群从原发性肿瘤脱落并经由血液或淋巴结扩散至身体不同部位的癌细胞。为检测微转移灶，将结直肠癌类器官细胞悬浮于磷酸盐缓冲液（PBS）中以维持pH值，并将细胞悬液装入注射器。接着，将麻醉后的小鼠俯卧位放置于手术台上。使用剪刀在左侧腹下部做一小切口，暴露脾脏。用镊子轻轻将脾脏拉出，缓慢将细胞悬液注射至脾脏内。使用缝线闭合切口，并将动物放回笼中。持续观察直至其恢复。
在完成预期的注射时间后，处死小鼠以分离原发肿瘤和不同组织。在荧光显微镜下观察所分离的组织。表达GFP的癌细胞在脾脏注射部位形成原发肿瘤。部分来自原发肿瘤的癌细胞会迁移至其他器官（通常为肝脏），形成微转移灶。在以下实验方案中，我们将建立一种表达GFP的结直肠癌类器官细胞的实验性转移小鼠模型。
— 为建立结直肠癌患者来源肿瘤异种移植的实验性转移模型，将单细胞悬液稀释至每50微升含4×10⁴个细胞的浓度，每只小鼠注射50微升细胞悬液至配备22号针头的注射器中。将第一只麻醉后的NOG小鼠俯卧置于实验台，于左侧腹下部做一小切口。
使用无菌剪刀和镊子小心剪开腹膜，暴露脾脏，并用镊子夹住附着在脾脏上的脂肪组织。然后，缓慢向脾脏内注射 50 µL 肿瘤细胞悬液，注意观察，确保无泄漏发生。
在完成所有小鼠的注射并根据需要进行缝合后，将动物放回其原饲养笼中，并在肿瘤细胞接种后一天检查缝合部位是否渗漏以及动物存活情况。使用游标卡尺每周测量肿瘤大小，直至达到预定的实验终点时，收获原位肿瘤及相关组织。将剥离的肿瘤和器官置于冰上预冷的10厘米培养皿中的5毫升冰浴PBS中，并在体视荧光显微镜下观察剥离组织的GFP表达情况。