从小鼠结直肠癌模型全血样本中分离循环肿瘤细胞:一种获取循环肿瘤细胞的方法

0 次观看3:50 分钟 • April 30th, 2023

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循环肿瘤细胞(CTCs)是指从原发性肿瘤脱落并进入血液循环的癌细胞。大多数CTC在血液中可不附着于表面而存活,因此我们可直接从大多数癌症患者的血液中检测到这些细胞。

血液中的循环肿瘤细胞(CTCs)可能提示肿瘤在体内的扩散,因此识别这些细胞有助于了解癌症的进展。首先取一只已麻醉的结直肠癌小鼠模型,通过心脏穿刺采集血液。将血液转移至含有密度梯度介质的锥形管中,离心以分离血液成分。

弃去含有血浆的最上层,收集位于界面处的外周血单个核细胞组分(PBMC),置于另一试管中。接着,向PBMC细胞中加入抗EpCAM抗体,并在荧光显微镜下观察。循环中的循环肿瘤细胞(CTC)表达一种称为上皮细胞黏附分子(Epithelial Cell Adhesion Molecule,EpCAM)的细胞标志物。因此,抗EpCAM抗体可用于识别EpCAM阳性的CTC。

收集CTCs并储存以用于后续下游分析。在以下实验方案中,我们将从小鼠结直肠癌模型血液的外周单个核细胞组分中鉴定表达EpCAM的CTCs。

— 为在适当的实验终点分离循环肿瘤细胞,将每管15毫升锥形管中加入5毫升密度梯度介质,并小心地将从荷瘤动物采集的全血样本转移至密度梯度层上。

通过离心分离细胞,并小心收集含有单个核细胞的界面层。用移液器将单个核细胞转移至新的15毫升离心管中,进行第二次离心,随后用PBS洗涤两次。第二次洗涤后,将细胞沉淀重悬于200 µL含EDTA的PBS中,并向每个样本加入4 µL抗EpCAM抗体,在冰上避光孵育20分钟。

接下来,使用疏水屏障笔在每个无菌的6厘米培养皿中为每个样本画一个直径约1厘米的圆,向每个圆内加入700微升挑取缓冲液,随后加入50微升细胞悬液。使用显微镜检查细胞密度,并让样本静置约五分钟。然后,通过EpCAM阳性筛选细胞液滴中的细胞,并使用显微操作仪将目标细胞转移至50微升适用于后续下游分析的适当缓冲液中。

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最后更新:22 八月 2026