皮下移植试验:一种将黑色素瘤细胞从供体移植到受体斑马鱼模型的方法

- 在黑色素瘤移植试验中，来自荷瘤斑马鱼的癌细胞被移植到免疫功能低下的受体模型中，以研究肿瘤发展。首先取一条安乐死的荷瘤供体斑马鱼，然后手术从其体内切除肿瘤。将肿瘤转移到含有合适缓冲液的培养皿中，并将其切成小块。

接下来，使用移液管研磨肿瘤片段。这会将肿瘤碎片解离成单个细胞。现在，将肿瘤细胞悬液装入注射器中。随后，在滤纸上制备免疫功能低下的受体 Casper 斑马鱼。斑马鱼的这种色素沉着缺陷的突变变体缺乏黑色素细胞和虹膜细胞，使其透明且用途广泛，可用于成像和移植实验。

接下来，将预装的黑色素瘤细胞悬液皮下注射到腹膜腔上方的区域，位于 Casper 斑马鱼后脑和背鳍之间的中间。现在，将受体鱼转移到水中并监测它以观察肿瘤的发展。斑马鱼透明的身体有助于轻松观察发达的肿瘤。

在以下方案中，我们将展示黑色素瘤细胞从转基因荷瘤斑马鱼供体移植到免疫功能低下的受体 Casper 鱼模型。

- 在移植前一天用 25 Gy 的伽马射线辐照照射受体 2 至 3 个月大的 Casper 鱼后，让鱼在鱼水中恢复。使用三卡因对荷瘤鱼实施安乐死。切开肿瘤并将其放入培养皿中，加入约 5 毫升过滤器灭菌的 0.9x PBS 和 5% FPS。用剃刀在溶液中切块肿瘤。

在室温下使用 P1000 移液器研磨以产生单细胞。将体积增加到 25 毫升。通过 40 微米网状过滤器过滤溶液，并在台式离心机中以 453 rcf 离心 10 分钟。将沉淀重悬于 0.9% PBS、5% FBS 中至所需浓度。

使用血细胞计数器计算准确的细胞数量并稀释细胞悬液，使最终注射体积约为 5 微升。例如，如果要注射 50,000 个细胞，则应将细胞悬液稀释至每微升 10,000 个细胞的最终浓度。每隔几分钟轻弹一次含有细胞悬液的试管，以防止细胞聚集。

用 100% 乙醇和 0.9x PBS，洗涤 26 秒规（斜面尖端）701 N 10 微升汉密尔顿注射器 2 至 3 次，然后将 5 微升细胞悬液装入注射器。在三卡因中麻醉辐照的受体鱼后，将其侧放在潮湿的 Kimwipe 上。

用一只手稳定鱼，将针头斜面朝上以 45 度角插入腹膜腔上方的鱼侧，大约在后脑后缘和背鳍内缘之间的中间位置。轻轻按下柱塞。让鱼在新鲜的鱼水中恢复，并每天观察鱼的肿瘤植入情况。如果发生植入，还可以观察到持续生长和疾病发展。