肾脏平装制备:解剖和准备用于成年斑马鱼肾脏显微镜分析的平装程序

成年斑马鱼包含一个扁平的肾脏，通过结缔组织附着在体背壁上。它由三个主要区域组成：头部、躯干和尾部。肾脏的功能单位肾单位高度分支并流入两个主要的集合管。

要分离肾脏，首先，准备一条被安乐死的成年斑马鱼，其腹侧朝上。在鳃盖后面做一个切口 - 覆盖鳃的骨瓣 - 以去除头部。随后，从头部到尾鳍或尾鳍的底部再做一个切口，以暴露并去除内脏。

现在，用针打开体壁以可视化肾脏。解剖下面的结缔组织，将肾脏与背壁分离。将器官转移到装有合适缓冲液的小瓶中，彻底清洗以去除碎屑。缓冲液有助于提供生理条件。洗涤后，将用缓冲液水合的肾脏放在载玻片上。

确保肾脏完全变平，必要时在结缔组织上切开。此步骤有助于在成像过程中轻松可视化。最后，使用盖玻片固定器官准备，盖玻片的角落贴有造型粘土片。粘土有助于防止组织变形。平装组织现在已准备好进行显微镜分析。

首先，从麻醉的鱼身上倒出任何多余的溶液，并将其放在纸巾或纸巾上。去除头部和内脏后，用超细解剖针针钉开体壁。找到粘附在动物背壁上的肾脏器官。

使用细镊子将肾脏从背壁上分离出来。轻轻地将肾脏放入装有 1x PBS 的 5 毫升玻璃瓶中，洗涤 3 次，每次 5 分钟。用转移移液器取出肾脏，并将其放在装有一到两滴 1x PBS 的干净载玻片上。

使用细镊子将载玻片上的肾脏压平，确保没有组织卷曲或以其他方式自行翻倒。钨丝工具可用于在结缔组织上做小切口，以促进肾脏的平坦定位。

接下来，将小块造型粘土放在 18 x 18 毫米玻璃盖玻片的每个角上。慢慢地将盖玻片放在肾脏上，保持一个小角度以尽量减少气泡的滞留。如有必要，额外添加一滴 1x PBS 以填充盖玻片和载玻片之间的空间。