Name: 同时神经刺激，并记录在水迷宫的设计和构建一个具有成本效益探头 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: 学习构建低成本防水探头系统，用于清醒动物的同时神经记录与刺激。该方法可定制电路设计，实现可靠的海马区局部场电位采集，显著降低实验成本。

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我们感谢Justin Riceberg在头戴式设备测试中提供的技术支持。本工作部分由美国国立卫生研究院基金MH65658、MH073689和F30 AG034003-01A1以及西奈山医学院资助。

1. 头戴装置设计与制备概述
一个完整的头戴式前置放大器系统由以下组件构成：
<ol>
	<li>一块由计算机设计的集成电路板，具有四个记录通道和两个刺激通道。</li>
	<li>将记录和刺激通道传递至动物头端适配器相应连接点的电极。</li>
	<li>用于将记录和刺激通道传递至滑环换向器的拖缆和接口。</li>
	<li>在头端适配器和集成电路上采用的两种防水措施。</li>
</ol>
2. 头戴装置的设计与布局
我们使用一款市售的计算机辅助设计软件（www.expresspcb.com）设计了一块印刷电路板，其上包含4个源极跟随器和2个直通式刺激通道。设计了一个头戴式记录装置，并将该设计图案在更大的电路板上重复排列，以实现低成本批量生产多个记录装置。设计文件被发送至印刷电路板（PCB）制造服务商，由其制作双面双层电路板，采用顶层和底层铜层，并对所有通孔进行金属化处理。电路板采用锡/铅焊料镀覆的走线和焊盘，基材为工业标准的FR-4层压板。该PCB可下单后于下一个工作日发货。单个记录装置从大面积拼版的PCB板上切割下来，电子元件通过焊料连接。本实验方案所用记录装置的布局示例如图1所示。有关PCB设计的详细说明和技巧，请参阅制造商网站。
3. 电子元件的准备与焊接
本方案中使用的所有电子元件均为表面贴装器件（SMD）类型。每种器件类型（电阻、电容等）的封装尺寸均经过选择，以最大限度减少头级电路板上的空间浪费，但如有需要，也可使用较大的SMD元件。
<ol>
	<li>将元件在电路板上排列整齐，并做好焊接准备。</li>
	<li>在待焊接的锡/铅焊盘上放置少量焊料，将烙铁尖靠近以熔化焊料并使其牢固附着在焊盘上。</li>
	<li>先焊接电容器，再焊接电阻器，最后焊接运算放大器。</li>
	<li>运算放大器可能因过热而损坏。我们使用可调温的焊枪，并采用熔化焊料所需的最低温度。尽量缩短加热时间，以形成良好的焊点。我们发现，沿信号或电源走线施加焊料，在焊盘上形成一个小的焊料储池，操作起来较为方便。</li>
	<li>使用欧姆表检测各电阻器的阻值，确保其符合预期值。</li>
	<li>仔细检查每个焊盘，确保没有焊料连接或桥接相邻焊盘。若存在焊桥，可重新加热熔化焊料，并用镊子将其断开。</li>
</ol>
4. 植入物与系留接口的组装与制造
<ol>
	<li>将一根23 Ga的套管插入9针ABS插座的一个未使用端口中，以提供机械支撑。</li>
	<li>剪六段长度为1 cm的绝缘漆包线，用于连接雌性Amphenol插针与ABS插座。</li>
	<li>使用少量焊料，从插针尖端加热，将雌性插针焊接到漆包线上。</li>
	<li>将每根漆包线的另一端焊接到ABS插座中。</li>
	<li>将雄-雌MillMax插针对准头级装置拖缆侧焊盘位置，压紧插针使其与PCB形成紧配合，然后按顺序将每个插针焊接到对应的焊盘上。</li>
	<li>将环形螺母套在神经植入物连接器上，并将所有雌性插针插入塑料基座上相应的位置。</li>
	<li>在ABS插座连接器顶部涂抹丙烯酸胶（万能胶），将其固定在头级装置底部。同时，在头级装置的拖缆侧粘接23 Ga套管以提供支撑。</li>
</ol>
5. 头戴设备的防水处理
<ol>
	<li>为使头戴装置防水，需用5分钟快干环氧树脂包裹整个集成电路及所有暴露的金属表面。初始干燥需5-10分钟，完全固化需60分钟。</li>
	<li>应在动物端伸出的雌性插针周围的9针ABS插座表面涂抹Poster Tack橡皮泥。</li>
	<li>为达到最佳防水效果，应将ABS插座与ABS插头对接，并拧紧环形螺母。同时，应用一小条Parafilm膜包裹接口处，以防止水分接触针状连接器。</li>
</ol>
成功的秘诀
<ol>
	<li>焊接运算放大器时，切勿过热塑料封装。若出现可见的烧焦或熔化现象，应立即拆下运算放大器并更换。即使无明显熔化，过高的温度也可能损坏运算放大器。焊接完成后，应使用信号发生器测试每个通道。</li>
	<li>确保前置放大器上不存在杂散连接或焊锡短路。可使用吸锡带拆除元器件或清除多余的焊锡。</li>
</ol>
6. 代表性结果
良好的记录应在移动过程中持续跟随输入源信号，不会出现信号中断或断续的情况。为测试头级，用户应使用函数发生器作为每个记录引脚的输入，并在Mill Max插头输出端评估波形。物理移动头级不应影响所记录波形的形状。
<img src="/files/ftp_upload/2155/2155fig1.jpg" alt="PCB设计图；A和B电路带有用于电子信号路径分析的走线。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 图1. （A）印刷电路板（PCB）顶层的示意图。红线表示铜走线。黄线表示用于电子元件定位的可选丝印层。图中显示了运算放大器的位置（中央黄色方块）、电阻（较小的黄色方块）和电容（最小的黄色方块）。（B）PCB底层的示意图。绿线表示铜走线。大面积的绿色填充区域代表接地层。此示意图的模型文件可供下载。

<ol><li>Morris, R. G., Garrud, P., Rawlins, J. N., O'Keefe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Place+navigation+impaired+in+rats+with+hippocampal+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Place navigation impaired in rats with hippocampal lesions.</a> Nature. 297, 681-683 (1982).</li>
<li>Rolston, J. D., Gross, R. E., Potter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+low-cost+multielectrode+system+for+data+acquisition+enabling+real-time+closed-loop+processing+with+rapid+recovery+from+stimulation+artifacts.+Front%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroengineering%22%5BJournal%5D)">A low-cost multielectrode system for data acquisition enabling real-time closed-loop processing with rapid recovery from stimulation artifacts. Front.</a> Neuroengineering. 2, 12-12 (2009).</li>
<li>Fee, M. S., Leonardo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miniature+motorized+microdrive+and+commutator+system+for+chronic+neural+recording+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Miniature motorized microdrive and commutator system for chronic neural recording in small animals.</a> J. Neurosci. Methods. 112, 83-94 (2001).</li>
<li>Shirvalkar, P. R., Rapp, P. R., Shapiro, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional+changes+to+hippocampal+theta+gamma+oscillations+predict+memory+for+recent+spatial+episodes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Bidirectional changes to hippocampal theta gamma oscillations predict memory for recent spatial episodes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (15), 7054-709 (2010).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

基于水迷宫的行为学任务为实时探究动物的认知能力与神经表征提供了有效的工具1。在涉及水迷宫的行为神经生理学研究中，使用轻便且低成本的前置放大器头戴装置尤为关键。由于逃离冷水本身即为动物提供了内在驱动力，因此可在多次试验中持续检测其行为，而无需面对在干迷宫中难以激发动物动机的问题。本文所述的低成本前置放大器装置将使科研人员能够在水迷宫任务中检验神经功能的相关假说，同时无需担忧昂贵设备可能受损的风险。
本方案旨在为定制化前置放大器设计提供一个起点。所提供的电路图易于调整，可增加记录或刺激通道，并可根据实验人员的需求进行缩放。特别是，通过采用商用针式连接器装置，可以构建能够与市售电极接口板匹配的前置放大器。尽管本方案中提供的示例在每个通道上均采用单位增益源极跟随器，感兴趣的读者可通过更改电阻和电容的配置来调节放大倍数（有关数据采集系统的详细综述，请参见2）。
尽管与电极植入和定位相关的技术不在本文讨论范围之内，但我们已采用以下装置来记录固定深度电极的信号（Shirvalkar e...

<table><tbody><tr><td>定制设计的集成电路板</td><td>ExpressPCB.com</td><td>定制</td><td>双层双面PCB</td></tr><tr><td>表面贴装电阻器</td><td>贸泽电子</td><td>RK73B1JTTDD156J</td><td>1/10 W，15 MΩ，0603，厚膜</td></tr><tr><td>表面贴装电容器</td><td>Newark公司</td><td>0402YD104KAT2A</td><td>0.1 μF（0402）</td></tr><tr><td>表面贴装运算放大器（四通道FET）</td><td>贸泽电子</td><td>595-TLC2274AIPW</td><td>四通道FET - 低噪声</td></tr><tr><td>9针ABS插座</td><td>Ginder Scientific</td><td>GS09SKT-220</td><td>用于动物连接</td></tr><tr><td>9针ABS插头</td><td>Ginder Scientific</td><td>GS09PLG-220</td><td>用于植入动物体内</td></tr><tr><td>黑色Delrin环形螺母</td><td>Ginder Scientific</td><td>GS09BDN-220</td><td></td></tr><tr><td>黑色Delrin保护帽螺母</td><td>Ginder Scientific</td><td>GS09BDC-220</td><td>用于保护动物&amp;rsquo;s植入物</td></tr><tr><td>Amphenol插针（公头）</td><td>Ginder Scientific</td><td>220-P02</td><td></td></tr><tr><td>Amphenol插针（母头）</td><td>Ginder Scientific</td><td>220-S02</td><td></td></tr><tr><td>5分钟环氧树脂</td><td>Devcon公司</td><td>S-208 / 20845</td><td></td></tr><tr><td>海报粘土</td><td>Elmer&amp;rsquo;s</td><td>026000015318</td><td></td></tr><tr><td>松香芯焊锡</td><td>Radio Shack</td><td>64-009</td><td></td></tr><tr><td>电烙铁</td><td>Weller</td><td>Pyropen WSTA6</td><td>（可调温度）</td></tr><tr><td>金属镊子</td><td>精细科学工具</td><td>5号</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm薄膜片</td><td>美国国家罐业公司</td><td>Parafilm 4&quot; x 250&amp;rsquo;</td><td></td></tr><tr><td>漆包线</td><td>Belden</td><td>8052</td><td>涂覆绝缘漆</td></tr><tr><td>电流表/万用表</td><td>福禄克生物医学</td><td>77万用表</td><td></td></tr><tr><td>Millmax双排插针</td><td>Mill-Max</td><td>575 - 002101</td><td>0.05&quot;</td></tr><tr><td>吸锡带</td><td>Chemtronics</td><td>7-10L</td><td>0.75英寸</td></tr></tbody></table>

一种用于水中迷宫实验中同步神经刺激与记录的低成本前置放大器的设计与构建

Design and Construction of a Cost Effective Headstage for Simultaneous Neural Stimulation and Recording in the Water Maze

在行为神经生理学实验中，通常使用前置放大器探头和源极跟随器来研究神经活动。现有的商业产品往往价格昂贵、不易定制，且不具备防水性能。本文介绍一种用于清醒、自由活动动物的定制化集成电路探头的设计与制作方法，可同时实现4通道神经信号记录和2通道刺激。该探头采用一种免费且 commercially available 的CAD类设计软件进行设计，易于修改以适应不同规模需求（例如增加通道数）。定制印刷电路板采用表面贴装的电阻、电容和运算放大器构建单位增益源极跟随电路。探头通过环氧树脂、Parafilm封膜和合成橡胶腻子的组合实现防水。我们已成功使用该装置在大鼠进行水迷宫游泳任务时，通过独立通道同时记录局部场电位并刺激不同脑区。每台设备总成本低于&lt;30美元，可方便地批量制造。

我们提出一种低成本的方法，用于设计和构建具有同步神经记录与刺激功能的轻量化头戴式前置放大器系统。该设备可进行防水处理，适用于游泳动物实验。

前置放大器和源极跟随器常用于行为神经生理学实验中研究神经活动。现有的商业……

本视频演示了一种构建头戴式前置放大系统的方法，该系统可在清醒行为动物中同时进行长期植入电极的记录与刺激。首先，为具有特定数量记录和刺激通道的头戴式装置设计印刷电路板。文中展示了两种源极跟随电路的示例。然后将电子元件出售给电路板，并制作头戴式装置和系绳电缆连接器，以提供头戴式装置与动物植入物之间的接口。由于系统中没有松动的连接，因此可以从大鼠海马体获得可靠的局部场电位记录。与购买商用头戴式放大器系统等现有方法相比，该技术的主要优势在于成本可降低数千美元，并且能够针对特定的刺激和记录实验轻松进行定制。由于该方法能够同时记录和刺激处于行为状态下的大脑，因此有助于识别和控制认知的神经机制。反过来，这些方法最终可能有助于改善功能并治疗人类的脑部疾病。本视频介绍的低成本头戴式前置放大器系统可实现同时进行神经记录和刺激，并且可以制成防水型，适用于游泳动物的实验。一个完整的系统由以下组件构成：一台计算机、一块设计专用的集成电路板，该电路板具有四个记录通道和两个刺激通道。金针通过动物头部固定装置上的独立连接器，将脑信号传递至头级放大器，同时将刺激信号传递至大脑。一根拖曳电缆及其连接器通过滑环换向器将记录和刺激通道传递至计算机化的生理学工作站。头端和集成电路有两种形式的防水设计。现在，让我们使用一款商用软件CAD工具来查看头端的设计与布局。设计了一块印刷电路板，其上包含四个单位增益源极跟随器和两个直通式刺激通道。首先，在两侧创建连接器焊盘，用于连接拖线和动物端的针式连接器。一个四通道场效应管运算放大器可接受最多四个通道的正负输入。需要两条电源线，每条均可连接至接地端。使用0.1微法电容器，以防止运算放大器中可能出现的振荡。构建一个单位增益放大器电路时，将信号接入运算放大器的同相输入端，然后将输出端连接回反相输入端。接着，在刺激通道中，将10 MΩ电阻串联在同相输入端与地之间。使用VS连接输出端与输入端的直通走线。通过过孔引导走线至电路板的另一层并返回。最后，在背面层创建一个大的接地焊盘，用于连接所有用于接地的过孔。该接地焊盘应连接至接地引脚，并引出至连接线和动物端。设计完成单个头戴式放大器后，将该设计图案在更大的电路板上进行阵列化排布，以实现低成本批量生产多个头戴式放大器。CAD 文件被传输至印刷电路板制造服务商，由其使用顶层和底层铜层制作双面双层板，并对所有孔进行通孔电镀。采用锡铅材料，使用与行业标准 FR-4 层压板相对应的镀锡焊盘和走线。单个前置放大器模块从大片拼接的 PCB 板上切割下来，并通过镀锡将电子元器件进行连接。现在让我们学习如何连接电子元件。首先，将电子元件在电路板上进行合理布局，为焊接做好准备。在待焊接的锡铅焊盘上放置少量焊料，然后将电烙铁的尖端靠近焊料，使其在焊点处熔化。使用焊锡将电容器首先焊接至焊盘，然后焊接电阻器，最后焊接运算放大器。由于运算放大器可能因过热而损坏，应使用可调温的焊枪，并采用熔化焊锡所需的最低温度。为形成良好的焊点，应尽量缩短加热时间。我们发现，通过在信号线或电源走线上涂覆焊料，形成流入焊盘的小型储料区或焊料堆，操作起来较为方便。现在使用欧姆表测试电阻器两端的阻值，确认其达到预期数值。仔细检查每个焊盘，确保没有焊料连接或桥接相邻焊盘。如果有焊桥存在，可在此处加热熔化焊料，并用镊子断开焊桥。现在我们来看如何组装和制作拴系接口。首先，将一段19号规格的注射针管插入九针A型BS插座的一个未使用端口中，以提供机械支撑。剪六段两厘米长的绝缘漆包线，用于将母针和酚针连接到ABS插座。现在，在每根针脚上少量上锡，从针尖向针肩加热，使母针与漆包线焊接牢固。将公母Milax针脚置于头级装置拖缆侧的焊盘上，并将针脚压紧到PCB上，确保形成可靠的压接连接。然后按顺序将每个插针焊接到对应的焊盘上。接着，将环形螺母置于神经植入物连接器上方，并将所有母插针推入塑料底座上相应的位置。在ABS插座连接器顶部涂抹丙烯酸胶，将其固定在头戴装置的底座上。最后，将19号导管粘接到头戴装置的系留侧以提供支撑。接下来介绍如何对头戴装置进行防水处理：使用5分钟环氧树脂覆盖整个集成电路及所有暴露的金属表面。初始固化需5至10分钟，完全固化需60分钟。在动物端突出的母针周围，将修补用腻子涂抹于九针A BS插座的表面。为达到最佳防水效果，应将A BS插座与A BS插头对接，并拧紧环形螺母。用一小条Parafilm薄膜包裹接口处，以防止水接触针状连接器。现在我们将展示一些典型的结果。以一次成功的记录为例，良好的记录能够在运动过程中持续跟随输入源信号，而不会出现信号中断或丢失的情况。有关电生理学或局部场电位（LFPS）的良好参考文献，请参见文献二。当通过特定输入通道传递电流时，用户应确保信号不会串扰到相邻通道。这可以通过依次将信号通过每个通道，并测试所有其他通道的输出来实现。如果通道之间存在串扰，请参考第三篇参考文献以获取有用的建议。用户可能希望将头戴式装置平放在动物头部，或增加额外通道。我们已成功制造出带有额外通道和不同配置的头戴式装置，前提是已掌握相关技术。该技术可采用流水线式操作，同时构建多个头部固定装置，从而提高可重复性，并为损坏的头部固定装置提供快速备用方案。该方法可与其他技术结合使用，例如靶向药物输注或光遗传学刺激，以研究不同神经递质和神经调质如何参与记忆的脑机制。我们已结合这些技术，在大鼠海马中记录并调控了可预测记忆表现的脑节律。

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科研

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Neuroscience

神经科学

同时神经刺激，并记录在水迷宫的设计和构建一个具有成本效益探头

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自由游动鱼类中通过可移动四极电极进行神经元无线电生理记录

本文介绍的方案提供了关于实时同步进行脑电图（EEG）和行为学评估的信息。我们详细阐述了该方案所涉及的全部步骤，为神经科学多个领域的研究人员，特别是学习与记忆领域的研究者，提供了一种具有吸引力的解决方案。...

同步监测无线电生理信号与记忆行为学测试作为研究海马神经发生的一种工具

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低成本脑电图记录系统结合毫米级线圈用于活体小鼠脑部经颅刺激 体内

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小鼠海马与前额叶皮层的双细胞外记录

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