通过分散实验检测生物膜解体

从含有细菌生物膜的多孔板开始——细菌被包裹在保护性的胞外聚合物基质（EPS）中。

吸弃培养基以去除非黏附性细菌，并进行洗涤。

使用仅含缓冲液、含葡萄糖的缓冲液、含胆盐的缓冲液，或含葡萄糖和胆盐的缓冲液处理含有生物膜的孔。

缓冲液和葡萄糖处理有助于释放细菌酶，从而降解生物膜的胞外多糖（EPS）。

这会导致生物膜解体，从而释放出细菌。

胆盐处理以及胆盐与葡萄糖联合处理可模拟应激条件，并使细菌保留在具有保护作用的胞外多糖（EPS）内。

将每个孔中的上清液转移至新的多孔板中。

将稀释的上清液点样于琼脂平板上，并进行培养。

对细菌菌落进行计数，并确定每种处理的细菌分散程度。

与胆盐处理相比，缓冲液和葡萄糖处理显示出更高的分散度，表明生物膜发生解体。

使用酶标仪测定过夜培养生物膜板的 OD₆₀₀ 值，以对照孔作为空白。随后，使用真空泵抽吸去除培养基，注意不要扰动塑料表面附着的菌群。用 200 微升无菌 PBS 轻柔地清洗各孔两次。

用预热的 PBS 洗涤后，向三个孔中分别加入 130 微升的预热 PBS、含葡萄糖的 PBS、含胆盐的 PBS 以及含胆盐和葡萄糖的 PBS。然后将培养板在 37 摄氏度孵育 30 分钟。30 分钟后，从孵育箱中取出培养板。用移液器将上清液转移至新的无菌 96 孔板中。

最后，用 PBS 在 96 孔板或稀释板中对上清液进行 1 至 10 倍的系列稀释。然后使用多通道移液器将每种稀释液各 5 µL 转移至 LB 琼脂平板上。将平板在 37 °C 下过夜培养。次日，计数菌落数量。