多光谱实时荧光成像术在妇科肿瘤前哨淋巴结的检测

以下实验的总体目标是在宫颈癌或外阴癌手术过程中检测前哨淋巴结。前哨淋巴结是肿瘤引流区域的第一个淋巴结。在该操作中，将荧光剂吲哚菁绿（indocyanine green，ICG）与标准蓝色染料共同注射至原发肿瘤周围。

溶液将被推送至第一个引流淋巴结。手术室在术前会安装一套定制的术中多光谱荧光相机系统，该系统基于荧光信号实时记录体内淋巴流动过程，并结合体内及体外结果评估荧光信号强度以及传统的蓝色染色检测方法，从而引导外科医生切除前哨淋巴结。

与现有方法相比，该技术的主要优势在于其为一步法操作，可在手术过程中同步实现淋巴结的可视化与切除。这一平台技术不仅可为外科医生提供解剖学信息，同时还能提供体内动态实时荧光示踪，从而改进当前外科肿瘤学的理念。为执行本方案，需设置术中多光谱荧光相机，该设备通常为定制化配置。

此处所示的系统由慕尼黑生物与医学成像研究所开发。在与SEARCHs的密切合作下，采用激光激发荧光探针。相机的滤光片被调节至近红外荧光，激发波长为750纳米，发射波长为800 ± 20纳米。发射光通过光学系统后，将被分离为可见光、固有荧光和近红外荧光。

CCD 相机经过校准，可检测独立的光束，从而对所有相机的多光谱信号进行处理，以获得准确的定量荧光四重生物分布。该系统还可校正伪影。控制台及手术室内显示器可在无菌条件下分别显示彩色图像和荧光信号，也可将二者叠加显示为单一图像。

将荧光造影剂吲哚菁绿（indocyanine green）用无菌蒸馏水配制成浓度为0.5毫克/毫升的溶液。切勿使用生理盐水，因为生理盐水会立即导致试剂沉淀。为防止光漂白并保持ICG试剂的完整性，应将溶液储存于避光、阴凉处。为尽量减少对标准外科手术流程的干扰，应在术前于手术室内安装并启动相机系统，并检查其与术中使用的高清屏幕的连接情况。按照视频中所示，使用标准无菌操作程序和条件，用无菌手术巾覆盖相机。

注射荧光剂之前，将摄像头置于患者上方，并暴露目标区域。调整变焦以聚焦摄像头，并关闭手术室内的灯光，以更清晰地检测荧光信号。

使用含有1毫升浓度为0.5毫克/毫升的吲哚菁绿（ICG）及等体积标准蓝色染料的莲花注射器。围绕原发肿瘤在四个象限内小心注射荧光剂，并尽量避免ICG溢出；若ICG污染外科手套，只需在操作过程中更换手套即可。

调整摄像头位置，确保持续记录目标区域。采集淋巴流动及荧光示踪淋巴结显像的静态图像或实时视频。曝光时间为180至200毫秒时，可获得质量良好的视频。

将所有数据相应保存在计算机中，以供后续分析。通过同步记录的荧光图像进行引导，对因注射专利蓝而引起的蓝色变色进行肉眼观察，这是该操作的标准步骤之一。随后进行前哨淋巴结的实时切除。

实时成像有助于检测荧光信号在非预期位置的分布，并依次获取所有切除淋巴结的离体荧光图像。在采集静态图像时，可使用较长的曝光时间。前哨淋巴结将被送检进行组织病理学分析，以确定是否存在肿瘤细胞。

本示例展示了采用多光谱荧光成像方案在活体中对阴部癌症患者的前哨淋巴结进行术中检测的强大能力。腹股沟区域的荧光淋巴结在切除前被清晰地可视化。在此段短视频中，我们展示了基于荧光信号在宫颈癌患者中实时检测前哨淋巴结的过程。

本文展示了一例宫颈癌患者淋巴结的离体图像。通过伪彩标度，将同一淋巴结的荧光图像叠加于其彩色图像之上，从而获得信噪比高、清晰度好的图像。该技术不仅为外科肿瘤学领域内前哨淋巴结的影像引导切除研究奠定了基础，同时也为实体瘤患者肿瘤边界评估及个体化治疗，以及可能存在局部区域转移的患者提供特异性肿瘤靶向成像的可能性。

因此，在观看本视频后，您应对妇科癌症中前哨淋巴结的实时术中荧光成像技术形成清晰的认识。