检测脑切片中细胞凋亡的TUNEL实验

从一个预先固定、脱蜡并复水的冠状脑切片开始，该切片包含正在经历凋亡的神经元，其特征为细胞死亡和DNA片段化。

为了使用TUNEL法检测凋亡性细胞死亡，用蛋白酶K处理脑切片。

蛋白酶K进入神经元并使DNA酶失活，防止DNA降解。

用缓冲液冲洗切片，以去除残留的酶。

加入含有荧光染料标记的脱氧尿苷三磷酸（dUTP）和末端脱氧核苷酸转移酶（TdT酶）的缓冲液，然后孵育。

在含有大量DNA片段的凋亡神经元中，末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）将这些荧光标记的dUTP连接到DNA片段的游离3′-羟基端。 

相比之下，健康神经元的 DNA 保持未标记状态。

使用DAPI对组织进行染色，DAPI是一种核染料，可结合健康和凋亡神经元中的DNA，使其细胞核呈现蓝色。

通过观察，脑组织中同时含有蓝色和绿色荧光的神经元证实了细胞凋亡的发生。