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神经科学
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从含有蛋白酶抑制剂和去垢剂的裂解缓冲液中的小鼠脑组织开始。
匀浆组织以将蛋白质释放到缓冲液中。蛋白酶抑制剂可阻断蛋白酶活性,防止蛋白质降解。
离心并收集含有蛋白质的上清液。
加入含有去垢剂和还原剂的上样缓冲液,以使蛋白质变性。
将对照组和样品中的蛋白质上样至SDS-PAGE凝胶中。施加电场以使蛋白质分离成不同的条带。
电泳后,将蛋白质条带转移至膜上。
使用含有脱脂奶粉的缓冲液处理膜,以封闭非特异性结合位点。
使用可特异性结合磷酸化 Tau 蛋白的一抗进行孵育。
洗涤并与酶标记的二抗孵育。
加入一种与酶反应产生光信号的底物,以确认磷酸化 tau 蛋白的存在。
与对照组相比,样品中出现强烈的发光条带提示存在神经退行性病变。