使用蛋白质印迹法检测磷酸化α-突触核蛋白

从脑脊液蛋白质开始，包括磷酸化α-突触核蛋白，后者是神经退行性疾病的生物标志物。

加入含有去垢剂、还原剂和示踪染料的上样缓冲液。

加热以变性蛋白质，然后将其上样至SDS-PAGE凝胶中。

进行电泳，根据分子量将蛋白质分离成不同的条带。

在振荡条件下，将凝胶置于印迹缓冲液中孵育。

然后，将蛋白质条带从凝胶电转移至膜上。

用固定剂处理膜以保留膜上的蛋白质，然后洗涤。

使用含有初级抗体和磷酸酶抑制剂的封闭溶液孵育，以维持α-突触核蛋白的磷酸化状态。

这些抗体仅与磷酸化的α-突触核蛋白发生特异性结合，封闭试剂可阻断非特异性结合位点，随后进行洗涤。

加入与一抗结合的酶偶联二抗，然后洗涤。

加入化学发光底物，与酶相互作用并产生化学发光。

化学发光条带证实了磷酸化α-突触核蛋白的存在。