0 次观看 • 1:30 分钟 • March 4th, 2025
从脑脊液蛋白质开始,包括磷酸化α-突触核蛋白,后者是神经退行性疾病的生物标志物。
加入含有去垢剂、还原剂和示踪染料的上样缓冲液。
加热以变性蛋白质,然后将其上样至SDS-PAGE凝胶中。
进行电泳,根据分子量将蛋白质分离成不同的条带。
在振荡条件下,将凝胶置于印迹缓冲液中孵育。
然后,将蛋白质条带从凝胶电转移至膜上。
用固定剂处理膜以保留膜上的蛋白质,然后洗涤。
使用含有初级抗体和磷酸酶抑制剂的封闭溶液孵育,以维持α-突触核蛋白的磷酸化状态。
这些抗体仅与磷酸化的α-突触核蛋白发生特异性结合,封闭试剂可阻断非特异性结合位点,随后进行洗涤。
加入与一抗结合的酶偶联二抗,然后洗涤。
加入化学发光底物,与酶相互作用并产生化学发光。
化学发光条带证实了磷酸化α-突触核蛋白的存在。
本文概述了一种检测磷酸化α-突触核蛋白的实验方案,该蛋白是与神经退行性疾病相关的生物标志物。该方法包括采用SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹技术来可视化检测蛋白质的存在。
通过蛋白质印迹法检测脑脊液蛋白中磷酸化α-突触核蛋白,为神经退行性疾病的早期生物标志物验证提供了可靠的工具。该实验流程可实现对翻译后修饰的定量评估,有助于降低神经退行性疾病研究项目的机制风险并提高靶点可信度。可靠的检测结果可为转化研究及疾病相关靶点的优先筛选提供依据。
该蛋白质印迹实验方案可融入神经退行性疾病研究从发现到临床前阶段的连续过程中,连接早期生物标志物验证与转化研究。
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最后更新:22 八月 2026