免疫组织化学法检测人脑病变组织切片中的路易小体

0 次观看1:23 分钟 • March 4th, 2025

取一段含有路易小体(Lewy bodies,简称LBs)的已复水的人类病变脑组织切片。

用过氧化氢溶液孵育,以抑制内源性过氧化物酶并防止非特异性染色。

将切片在柠檬酸盐缓冲液中加热,以暴露路易小体中α-突触核蛋白的抗原表位。 

使用封闭剂以防止非特异性抗体结合。

去除多余的封闭剂,并用靶向α-突触核蛋白的一抗孵育切片。

洗去未结合的抗体。

加入与一抗结合的生物素标记的二抗。

去除多余的抗体。

加入链霉亲和素-生物素-辣根过氧化物酶复合物,该复合物可结合生物素化的二抗。

洗去未结合的复合物。

加入显色底物,使其与过氧化物酶反应,形成棕色沉淀。

去除多余的底物。

使用复染剂将细胞核染成蓝色,以增强在显微镜下神经元胞质内路易小体中棕褐色染色的α-突触核蛋白与蓝色细胞核之间的对比度。