人脑组织中谷氨酸脱羧酶亚型的分析

从含有裂解缓冲液的人脑组织开始。

使用匀浆器匀浆组织，以释放蛋白质，包括对脑功能至关重要的谷氨酸脱羧酶（GAD酶同工型）。

将匀浆在冰上孵育，然后离心以沉淀碎片。收集含有蛋白质的上清液。

加入含有去污剂和还原剂的上样缓冲液，以使蛋白质变性。

将该样品和分子量标记物上样至梯度 SDS-PAGE 凝胶，通过电泳使蛋白质分离成不同的条带。

将蛋白质从凝胶电转移至膜上。

加入阻断剂以防止非特异性结合。

使用可与相应 GAD 亚型特异性结合的 GAD 亚型特异性一抗进行孵育。

洗涤以去除未结合的抗体。

使用荧光标记的二抗进行孵育。

再次洗涤，并在成像系统中观察蛋白条带。

通过荧光检测GAD条带，并使用蛋白分子量标记物确认其分子量差异。