Name: 器官型E18大鼠脑切片文化 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: 学习器官型脑切片培养技术，使用E18大鼠胚胎脑组织进行解剖、包埋和振动切片。该方法结合Millicell滤膜培养系统，可维持脑片活性五至七天，适用于神经发育、细胞迁移和再生医学研究。

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e18 大鼠脑组织器官型切片培养

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

从胚胎啮齿类动物脑组织制备的器官型脑片培养被广泛用于研究脑发育。尽管在体系统常具有诸多优势，但器官型脑片培养允许开展多种目前在体条件下难以实现的操作。迄今为止，胚胎期器官型脑片培养已被用于通过延时显微成像追踪单个细胞，对神经节隆起区（该区域难以通过子宫内电穿孔靶向）的基因表达进行操控，以及开展药理学研究。在本视频方案中，我们演示了如何从大鼠胚胎第18天（E18）的胚胎制备器官型脑片培养。该方案包括胚胎解剖、在冰上用低熔点琼脂糖包埋胚胎脑组织、使用振动切片机对包埋后的脑组织进行切片，最后将脑片转移至培养皿中的滤膜上进行培养。本方案亦可直接适用于制备不同胚胎发育阶段的大鼠和小鼠器官型脑片培养。

关键词：器官型脑片培养，脑发育，胚胎期，大鼠，小鼠，振动切片，低熔点琼脂糖，延时显微成像，基因表达操控，药理学研究

E18 大鼠脑组织器官型切片培养

来自胚胎啮齿类动物大脑的器官型脑片培养被广泛用于研究大脑发育。尽管在体系统常常具有一些优势，……

我叫Laura Elias。我是神经科学专业的研究生，目前在Arnold K. Stein的实验室工作。我们所在的机构是加州大学旧金山分校（UCSF）的再生医学研究所。今天我将向大家演示如何进行E18大鼠脑的器官型脑片培养。该操作包括取出脑组织，将其包埋于低熔点琼脂糖中，然后在切片机上进行冠状切片，再将切片置于脑片培养系统中。因此，在该脑片培养操作中，我们使用了几种重要的试剂和工具。你需要体视显微镜来分离脑组织。我们还使用这种 V 型 VT 1000 S 振动切片机，这是一种用于切片的良好系统。胶水的选择可能很重要。我们使用这种锁型胶水，因为它能很好地粘附脑组织；因为有时如果使用了错误类型的胶水，在切片过程中脑组织会脱落，这可能会带来问题。我们还使用这些 milli cell 滤膜，这些滤膜用于在培养过程中放置脑片，这也是该流程中的一个重要环节。在开始脑片培养流程之前，您需要先完成几个步骤。首先，您需要配制 A CSF，在完成 A CSF 配制后，应立即将其置于冰上冷却，同时用碳氧混合气（carbogen）进行通气。你还需要制备4%的琼脂糖凝胶。具体操作时，应使用低熔点琼脂糖，将其溶解于脑脊液（CSF）中，用微波炉加热溶解后，保持在50摄氏度直至用于包埋脑组织。你还需要配制脑片培养基；配制完成后，应将其置于37摄氏度环境中预热，以便在最后放入脑片时，培养基处于适宜温度。此时，您应准备好收集工具并开始切片培养过程。接下来，我们将从胚胎第18天的大鼠胚胎脑组织中制备脑片培养物。首先，我将通过脚趾夹捏法检查母鼠是否已完全麻醉。这是一个例子，大鼠仍然存在微弱的反射，当我挤压其足部时，它会稍微向后收缩后肢。因此，我们需要等待更长时间，或再次进行轻微麻醉，直到完全看不到任何反应为止。现在我将开始切开，以取出胚胎。我只需将皮肤拉起，以便获得一个整齐干净的切口。移除这里的一些胚胎，我将把它们切出来。因此，你可以在两个胚胎之间进行切割，然后沿着切口继续切割。现在我们可以取出这个胚胎，并通过在胎盘附近做一切口将其从胎盘上分离。接下来，我们将胚胎转移至冷的 aCSF 中，并在此处移除剩余的囊膜。是的，就在那里剪掉。现在这个胚胎已准备就绪，我们将开始制作脑切片。好的，现在我们已获得胚胎，接下来我将用剪刀剪下头部。好了，现在我可以开始解剖出大脑了。首先我们需要固定头部，方法是将固定针穿过眼眶以及后脑区域。这有助于我们将脑组织在培养皿中固定。正如你现在所看到的，我们的培养皿中已放置了一个固定好的脑组织，接下来我们将从后脑区域开始做一切口，然后继续向前端方向进行。首先，我将在小脑附近做一个切口。将剪刀插入皮肤和颅骨下方，然后将切口向上延伸至罗森塔尔区。接着，在大脑皮层末端两侧靠近脉络丛的位置再做两个横向切口。我将做一个向侧方延伸的切口，方向是那样，然后在那里再做一个切口。接着，我会用镊子

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科研

JoVE Journal

Biology

生物学

器官型E18大鼠脑切片文化

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神经元形态发生研究方法 离体 胚胎小鼠大脑皮层中的RNAi电穿孔技术

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制备幼年大鼠海马的器官型脑片培养

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用于研究出生后神经发生的器官型脑片培养

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使用基于FRET的传感器ATeam1.03YEMK对小鼠脑组织切片中细胞内ATP进行成像

本文描述了鼻周皮层-海马体脑片的制备方法。在逐步且受控的血清剥夺条件下，这些脑片会表现出逐渐发展的类似癫痫样活动，可被视为一种癫痫发生的离体模型。该系统是监测自发性活动动态变化的优良工具，也可用于评估癫痫发生过程中神经炎症特征的进展。...

内嗅皮层-海马器官型脑片培养中的癫痫发生模型

学习器官型脑切片培养技术，使用E18大鼠胚胎脑组织进行解剖、包埋和振动切片。该方法结合Millicell滤膜培养系统，可维持脑片活性五至七天，适用于神经发育、细胞迁移和再生医学研究。

E18 大鼠脑组织器官型切片培养

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