Name: E16大鼠胚胎在子宫内侧脑室注射和电穿孔 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 4 s
Description: 学习大鼠胚胎子宫内脑室注射与电穿孔技术，用于E16期神经发育研究。该方法实现基因高效递送，助力发育神经科学中的遗传功能探索。

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e16 大鼠胚胎的宫内脑室内注射与电穿孔

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

子宫内活体注射与电穿孔转染胚胎大鼠新皮质是一种强大的技术手段，可用于操控侧脑室壁上排列的单个前体细胞。该技术现已被广泛用于研究皮质发生过程，通过基因过表达或敲低，观察其对细胞增殖、迁移和分化的影响。与传统的基因敲除策略相比，子宫内电穿孔可在特定的时间窗口内快速操控一群细胞。本视频方案中，我们概述了实验操作流程，包括大鼠术前准备、开腹暴露子宫角、向发育中胚胎的侧脑室注射DNA、将DNA电穿孔转入侧壁排列的前体细胞，以及术后动物护理。本实验室在E15至E21天的大鼠上均应用此方案，但最常用的是E16天，本视频即以E16为例进行展示。

关键词：子宫内电穿孔，胚胎大鼠，新皮质，侧脑室，前体细胞，基因转染，皮质发生，细胞增殖，细胞迁移，细胞分化

E16 大鼠胚胎的宫内脑室内注射与电穿孔

子宫内活体注射与电穿孔技术应用于胚胎大鼠新皮质，为操控单个前体细胞提供了强大工具……

大家好，我叫William Ti，来自Arnold Creek Stein实验室。今天，我和同事们将向大家演示E16大鼠胚胎的子宫内注射。大家好，我叫Laura Elias。今天我将向您展示如何制备显微注射移液管，并为即将进行的脑室内注射和电穿孔实验装载移液管。我还将演示如何在E16大鼠胚胎中执行脑室内注射和电穿孔操作。在体电注射和电穿孔技术在大鼠中尤为有用，因为大鼠系统难以进行常规的遗传操作。好的，该手术过程中会使用多种外科器械。我们会用到一个游离器、几把持针器，其中一对为带齿持针器，另一对末端带有小齿。此外还会用到一把止血钳。这是一把剪刀，然后我们使用这两个订书器。较大的这个用于大鼠，较小的这个用于小鼠，使用七号订书钉，而这个使用九号订书钉，它们都是弹簧加载的。我们在此用于辅助手术的一些设备包括一个简单的带有双头的光纤光源。我们使用一个加热垫，通过循环温水来保持温度。工作台面则采用BTX公司生产的电穿孔系统。我们根据胚胎的大小使用几种不同尺寸的拨片。蓝色一侧为正极。好的，现在我们将对注射毛细管进行斜面处理。这一点非常重要：你的移液器必须具有足够大的开口，以便能够装载 DNA，但同时必须非常锋利，以免在注射时损伤胚胎。如果注射时损伤了胚胎，胚胎的死亡率将会显著升高，这是不可取的。因此，这实际上是该手术中一个非常重要的步骤。首先，我们将一些水滴加到正在旋转的磨边石上。然后，我们将取一根——让我们看看——就是一根小棒。我们将刚拉制好的移液管用胶带固定在这根棒上。然后使用其中一个显微操作器夹住移液管的斜面，使其能够在此处形成斜面。我们只需将移液管放置到位，并利用显微镜观察移液管的尖端。我们将它直接放在水中的斜面之上，施加轻微的压力。可以看到，针尖正抵住此处的石块。保持这一状态进行研磨，时间至少为15分钟。我喜欢将它们放置得更久一些，比如一小时左右。有时它们会变得非常、非常锋利，但具体磨边时间的长短确实因人而异。好了，现在我们来看，如图顶部所示，这是一根已经拉制完成但尚未进行磨边的移液管。因此，虽然它很锋利，但没有可用于加载DNA的开口。现在，下方的移液管已被削成斜面，可以看到这个漂亮的倾斜开口，它能够让你加载DNA，同时仍保留尖锐的尖端，以便在注射时不会造成任何损伤。好的，现在我们要用DNA填充注射用移液管。因此，以无内毒素的方式制备DNA非常重要，以确保在注射DNA时不会同时注入任何脂多糖。接下来，我们将取出DNA，并在此处准备好我们的点样膜。你需要在此处制备好点样膜，收集DNA，并将其作为一个小点样点直接加到该膜上。然后，我通常会取每10微升DNA使用约1微升的这种快速染料，我的DNA浓度通常为每微升1.5至1.7微克。使用这种染料有助于我们定位注射位置，并确保成功将样品注入脑室。然后，我将把这种快绿染料与我的 DNA 混合。接着，取注射电极，通过回拉活塞来

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E16大鼠胚胎在子宫内侧脑室注射和电穿孔

子宫内活体注射与电穿孔转染胚胎小鼠新皮层是一种强大的技术，可用于操控单个神经前体细胞……...

E15小鼠胚胎的子宫内脑室内注射与电穿孔技术

在子宫内 电穿孔是一种用于转染神经前体细胞的有效方法 体内根据电极的位置和电穿孔的发育时间点，可以选择性地靶向特定的皮层细胞亚群。随后可对这些靶向细胞进行分析 体内 或 体外...

在子宫内 电穿孔联合原代神经元培养用于研究皮层神经元亚群中的基因功能

高效基因递送至中枢神经系统多个区域 在子宫内 电穿孔

体外电穿孔转染中期小鼠胚胎菱脑唇下部

控制体细胞干细胞的扩增是阻碍其研究和治疗应用的主要因素。本文介绍了一种可在发育期和成年期时序性调控神经干细胞扩增的系统，该系统可用于增加小鼠大脑中生成的神经元数量。...

胚胎和成体神经干细胞的扩增 子宫内 电穿孔或病毒立体定位注射

来源：Koza, P., 等。利用慢病毒载体方法生成转基因大鼠。J. Vis. Exp.

基于慢病毒载体的大鼠受精胚胎转导

本视频展示了利用子宫内电穿孔技术将质粒DNA递送至小鼠胚胎小脑神经元细胞的方法。该技术有助于理解基因在正常脑发育过程中的体内功能，以及神经元细胞在肿瘤进展过程中基因表达的变化。...

基于子宫内电穿孔的基因递送技术：向小鼠胚胎小脑细胞注射质粒DNA的方法

可通过在 E16 时期对大鼠的皮层或海马体进行子宫内电穿孔（IUE），在发育过程中操控基因，从而实现对成年动物神经元连接的快速且靶向的修饰，以用于后续的行为学或神经病理学研究。通过共转染的荧光素酶的生物发光，对 IUE...

通过局部转基因技术制备转基因大鼠 在子宫内 电穿孔和 在体 生物发光筛选

本方案详细描述了如何通过特定方法转染C57BL/6中枢神经系统的不同区域 in utero...

大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、外侧隔核和纹状体特异性 子宫内 C57BL/6小鼠中的电穿孔技术

室管膜下结节状异位（PNH）是成年期最常见的皮质发育畸形（MCD）形式，但在大多数散发病例中，其遗传基础仍不明确。我们近期开发了一种策略，用于识别MCDs的新型候选基因，并直接验证其致病作用 体内.

一种结合染色体微阵列比较基因组杂交、全外显子组测序的新型策略 子宫内 电穿孔法在啮齿类动物中鉴定脑部畸形的致病基因

学习大鼠胚胎子宫内脑室注射与电穿孔技术，用于E16期神经发育研究。该方法实现基因高效递送，助力发育神经科学中的遗传功能探索。

E16 大鼠胚胎的宫内脑室内注射与电穿孔

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