显微切割的黑寡妇蜘蛛丝绸生产腺体

该程序的总体目标是从蜘蛛的腹部分离出七个不同的产丝腺体，并将这些组织用于分子和生化研究。这是通过首先麻醉蜘蛛来完成的。手术的第二步是将头颅、耳廓和腹部分开，并在一个小解剖皿中用昆虫针固定腹部。

该程序的第三步是在外骨骼上切开，以露出产生丝的腺体。该程序的最后一步是去除不同的产丝腺体。最终，可以获得结果表明，不同的产丝腺体通过分子和生化方法（例如分别进行定量实时 PCR 或质谱法）表达不同的丝 mRNA 或蛋白质。

这种方法将为蜘蛛生物学研究提供重要的见解，揭示储存在产生丝的腺体内的蛋白质。这些蛋白质的应用影响了军事和医学以及许多商业和工业应用。当我们需要更多地了解储存在蚕丝腺体内的蛋白质时，我们第一次想到进行这项特殊研究。

这种技术的主要优点是雌性黑寡妇蜘蛛的腹部非常大，很容易分离出产丝腺。刚接触这种方法的人可能会遇到困难，因为腺体在解剖过程中通常会破裂。还有一些解剖结构难以分离。

视觉演示对于良好的解剖至关重要。在开始解剖之前，演示该程序的是 Kobe LaMattina、Tiffany Tootin、Blasingame 和 Y Shaw。制备 500 毫升解剖缓冲溶液，由 0.1 摩尔氯化钠、0.015 摩尔柠檬酸钠和 0.1% 碳酸氢乙酯组成。

然后准备一个带有塑料衬里的纸板箱，以容纳蜘蛛并防止其爬出。我们通常从木头堆、推车或车库中获取黑寡妇蜘蛛，并使用玻璃罐将它们安置在实验室中。获得后，在处理蜘蛛的同时将蜘蛛从玻璃罐转移到盒子中。

为安全起见，请戴两副乳胶手套或园艺手套。然后用一个小塑料培养瓶，从背面接近蜘蛛，将蜘蛛滑入样品瓶中，并立即塞住样品瓶。将二氧化碳气体以 5 至 10 PSI 的浓度引入小瓶中 10 分钟以麻醉蜘蛛 应在蜘蛛仍处于麻醉状态时，在 5 分钟内从头颅脊髓中对腹部进行初步解剖。

将麻醉的蜘蛛放入一个小解剖皿中。夹住基座，狭窄的茎，连接腹部的头盖以释放腹部。头颅重生含有蜘蛛的尖牙，需要妥善处理。

小心取出放入培养皿中的头头 thax 并冷冻过夜。丢弃前，通过识别从腹部流出的液体部位，找到蜘蛛腹部由足细胞剪成的孔。使用单个解剖针，将针穿过孔插入腹部，将腹部固定在解剖盘上，调整蜘蛛的方向，使基座离解剖器最远，而 spint 最靠近解剖器。

使用一把微型剪刀，从足部细胞夹开始，然后通过外骨骼在每一侧横向切割，直到到达背侧。使用镊子剥开前外骨骼节段并在该位置插入第二个销钉。接下来，将解剖托盘与初始横向切口成 90 度角。

继续切割，直到达到 spints。切口将垂直于或垂直于初始侧切口。尖刺位于沙漏下方，呈圆形。

做垂直切口时不要切开 spints。将腹部浸入解剖缓冲液中。从最初的侧切口开始，将剩余的外骨骼向后剥离。

完成后，使用镊子应清楚地看到外观为白色至淡黄色的脂肪组织。开始梳理脂肪层，直到大部分脂肪被去除，丝腺清晰可见。如果存在虫卵，则应将其取出。

此时，按以下顺序解剖腺体。管状形式，主要吃鞭毛 formm，聚集体 minor ate assif，formm，然后是梨状。我们将按解剖顺序描述每个腺体。

管状腺体位于所有其他腺体的顶部，有三对非常长的圆柱形管，这些管子在腹腔中丰富。小心地将这些腺体从其余的腺体中梳理出来。让它们自由漂浮，但仍然通过管道附着在旋转器红色上。

接下来，梳理掉梨中也存在的两个主要安瓿腺。这些腺体大而呈新月形，有长而曲折的远端尾巴和宽度减小的近端鸭子。当靠近蜘蛛刺时，去除主要的安瓿腺并将它们放入无菌的 1.5 毫升微量离心管中。

取出腺体后将腺体放在冰上。接下来，去除鞭毛腺体。鞭毛形式腺也以梨的形式存在。

它围绕着多叶结构，有一个小的圆柱形锯齿形管，在将它们移除后将它们放在冰上后，该管向下延伸到 spints。在此之后，发现小的 alet 在形态上与大 alet 非常相似，但明显更小。成对发现的聚集腺大而多叶，并有一个非常大的排泄管和大的不规则裂片。

窦状腺大量出现，类似于短而小的手指状突起。梨状腺是腹部最小的腺体，有许多紧凑的圆柱形管道，类似于风扇，有许多小排泄管向下延伸到尖头。既然管状形式腺体是唯一自由漂浮的腺体，请用镊子捏住导管并小心拉动直到它被刺从出口点脱落，将其取出解剖后，闪蒸，将管子冷冻，氮气直至冻结，并在零下 80 摄氏度下储存。

或者，在解剖过程中独立切除腺体后，可以立即冷冻腺体。该图显示了在从腺体中分离总 RNA 后，使用定量实时 PCR 分析在不同的产丝腺（不包括梨状腺）中分离丝基因 TUSP one mRNA 水平。管状甲腺含有丰度最高的 TUSP one mRNA。

该图显示了从肾小管形式腺体中提取的蛋白质的氨基酸组成谱的典型结果。蓝色表示具有极性侧链基团的氨基酸，而红色表示具有非极性侧链基团的氨基酸残基。该图显示了溶出三联画后从梨状腺获得的蛋白质提取物的质谱分析。

这里的消解乘以 2 表示光谱强度的两倍放大。标有符号 pound 的光谱肽离子质量表示丝素蛋白 PYSP 在其显影后衍生的肽。这项技术为 soak 生物学界的研究人员铺平了道路。

它用于探索浸泡纤维生产、丝纤维组装和挤出所涉及的化学和分子过程。如果这项技术正确完成，可以在一个半到三个小时内完成。尝试此程序时，请务必戴上两副手套，直到蜘蛛牙被去除。

在该方法结束时，产丝腺可用于提取 RNA 和蛋白质。这些材料可用于下游应用，例如定量实时 PCR 以及质谱分析。从这些研究中可以收集的信息将有助于我们更好地了解蚕丝组装和蚕丝挤出途径。

看完这个视频，你应该对如何从雌性黑寡妇蜘蛛中分离出独特的七个产丝腺有一个很好的了解。