单个蠕虫的机械破坏以评估宿主-细菌相互作用的变异性

从年龄匹配、不育、新鲜杀死的成年 秀丽隐杆线虫 开始，具有透化角质层，悬浮在缓冲液中。

这些蠕虫的肠道感染了细菌。

取一个在缓冲液中含有磨料颗粒的深孔板，并将单个蠕虫转移到每个孔中。

用密封膜和盖子盖住板。

在低温下孵育板，以防止在组织破坏期间过热。

按下盖子密封孔。

使用组织破坏器，机械摇动板。磨料颗粒会破坏蠕虫组织，释放肠道细菌。

敲击板并离心以沉淀内容物。

混合内容物以均匀分布细菌，然后将它们转移到新鲜孔中。

在缓冲液中连续稀释细菌悬浮液。

将稀释液铺在琼脂平板上并孵育以形成菌落。

计算菌落以量化单个蠕虫肠道细菌负荷的变化。

为了准备蠕虫的机械破坏，请获得无菌的两毫升深孔96孔板和硅板盖。

使用无菌勺刮刀向每个孔中添加少量无菌 36 网格碳化硅，使网格几乎覆盖孔底。向每个孔中加入 180 微升 M9 蠕虫缓冲液。标记列和行，然后用硅板盖松散地盖住板。

接下来，将透化蠕虫转移到装有M9TX-01的小培养皿中，深度为一厘米。使用解剖显微镜，移液出 20 微升体积的单个蠕虫，并将它们转移到 96 孔板的单个孔中。要弹出粘在移液器上的任何蠕虫，请从培养皿的空旷区域吸出 20 微升 M9TX-01，然后将其释放回培养皿中。转移所有蠕虫后，用一张柔性密封膜覆盖 96 孔板，纸背面朝下放在样品孔上。

将硅密封垫轻轻放在柔性密封膜的顶部，不要将盖子向下压入孔中。将板置于 4 摄氏度下 30 至 60 分钟，以防止在中断过程中过热。板冷却后，将硅密封垫牢固地压入孔中以密封它们。

然后将板固定在组织破碎器中。以 30 赫兹的压力摇动板一分钟。然后将板旋转 180 度并重复摇晃一分钟。

在工作台上用力敲击板两到三次，以去除柔性密封膜上的任何砂砾。将板以 2,400 倍 g 离心两分钟，以收集孔底部的样品。然后取下硅胶盖并撕下密封膜。

要制备蠕虫消化物的十倍连续稀释液，请在 96 孔板的 B 至 D 行中填充 180 微升 1 X PBS。使用设置为 200 微升的多孔移液器，通过移液缓慢混合蠕虫消化物。将最大量的液体转移到含有PBS的96孔板的A行。

使用多通道移液器，从顶行取出 20 微升并分配到 B 行中，然后进行混合。对 B 行到 C，然后对 C 行到 D 重复此步骤，以获得 1000 倍稀释度。对于单定植蠕虫的细菌定量，将每种稀释液10至20微升接种在固体琼脂平板上。对于多物种定植，将每种稀释液 100 微升接种在 10 厘米琼脂平板上。