Name: 热休克法转化到大肠杆菌质粒DNA (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: 学习热休克法转化质粒DNA到大肠杆菌的技术，用于分子生物学和基因工程研究。该方法通过42摄氏度热激处理提高细胞膜通透性，实现外源DNA高效导入，为后续斑马鱼发育生物学实验奠定基础。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

使用热激法将质粒dna转化至大肠杆菌

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

使用热激法将质粒DNA转化至大肠杆菌（E. coli）是分子生物学的一项基本技术，其过程包括将外源质粒或连接产物导入细菌细胞。本视频方案描述了使用Genlantis公司提供的市售化学感受态细菌进行转化的传统方法。将化学感受态细菌与DNA的混合物在冰上短暂孵育后，置于42°C下45秒（热激），随后立即放回冰中。加入SOC培养基后，转化后的细胞在37°C下振荡孵育30分钟。为了确保无论转化效率高低均能获得菌落，将两种不同量的转化菌液分别涂布于平板。该传统方案可成功用于转化大多数市售的感受态细菌。此外，Genlantis公司的TurboCells还可用于一种新颖的3分钟快速转化方案，该方法详见产品说明书。

使用热激法将质粒DNA转化至大肠杆菌

将质粒DNA通过热激法转化至大肠杆菌是分子生物学的一项基本技术。该方法包括将外源...

大家好，我是 Alex Hoge。我在加州大学欧文分校生理学与生物物理学系的 Gym Hall 实验室工作。今天我将向大家演示如何通过电击法转化电感受态的大肠杆菌。今天，我将使用该技术将我的连接产物转化至大肠杆菌中，因为我接下来要在斑马鱼中进行一些整体原位杂交实验。好的，现在我们开始进行转化实验。首先，你需要将水浴锅或干浴器预热至42摄氏度。你需要将刚从主培养物中取出的细菌置于冰上。今天我们将使用来自ities的感受态细胞，同时将DNA也置于冰上。此外，你还需要一管处于室温或37°C的SOC培养基，以及含有氨苄青霉素的LB琼脂平板。现在我将把DNA加入到细菌中。操作时我会在火焰旁进行，以避免细菌污染。接下来，我将把连接产物与细菌混合。加入50 µL细菌后，立即放回冰上，可轻轻弹动管子以混匀细菌与DNA，冰上静置最多15分钟。现在15分钟已过，我们准备进行热激处理，即将细菌置于42°C下45秒。因此，我将试管从冰中取出，直接放入42°C水浴中，启动计时器计时45秒，然后迅速放回冰中，立即从42°C转移至冰上。然后我们等待两分钟。现在，我将向细菌中加入 SOC 培养基，并将其置于 37°C 环境中 30 分钟。我取 500 µL 的 SOC 培养基加入细菌中，然后放入我自制的小型培养装置中。因此，如果你打算在培养箱中使用离心管和临时制作的容器，请务必将离心管水平放置，因为这样它们的振荡效果会更好。现在我们已准备好将试管放入摇床中，以便在37°C下孵育30分钟。现在我们已经完成了37摄氏度的孵育，接下来要将细菌涂布到含有抗生素的LB培养基上。以我为例，所用的抗生素是氯霉素。取每个样本50 µL，加到平板上。因此，用剩余的500微升液体，将其放入小型台式离心机中离心，以沉淀细菌。离心后，我们得到一个良好的菌体沉淀，接下来需要去除几乎所有的SOC培养基，仅留下50微升，然后将这50微升浓缩的细菌涂布到平板上。因此，我大约移除了450微升。我就留这么多。现在我要将菌体沉淀重悬于剩余的 50 µL SOC 培养基中。之后，我可以将这 50 µL 转移至另一块平板上进行涂布。因此，我对每个样品进行抗性筛选，然后进行转染并涂布平板。最终每个样品将得到两个平板。现在我们需要将细菌均匀涂布到LB平板上。我将使用一些经过高压灭菌的玻璃珠，但你也可以使用一根做成类似涂抹棒形状的移液管。现在我要在培养皿上放几颗玻璃珠。这样很好。好了，10 和 15。加入珠子后，将所有培养皿像这样叠放在一起，轻轻摇晃，使珠子将细菌均匀地分散到培养皿的各个位置。因此，我在培养皿干燥之前持续移动它们。这意味着当你移动磁珠时，不应看到明显的液体条纹。例如，在这块平板中，磁珠倾向于聚集在一起，并出现大量条纹。这个有液体渗出的说明磁珠仍在移动，而这个干燥的则说明已完成干燥。现在培养皿已经干燥，因此我们可以弃去磁珠

transformation-of-plasmid-dna-into-e-coli-using-the-heat-shock-method

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

热休克法转化到大肠杆菌质粒DNA

对完整质粒进行定点突变是创建原始质粒微小变异体的简便方法。本文中，我们展示了一种利用常规试剂在质粒中引入碱基替换的简单且经济有效的方法。...

全质粒自制定点突变

来源：Stefan, A., et al., 大肠杆菌中蛋白共表达的多重优势。J. Vis. Exp. (2015)本视频演示了用携带抗生素抗性基因的质粒转化Escherichia...

使用高压电穿孔法进行细菌的制备与转化

本方案展示了热休克蛋白70（Hsp70）的分子伴侣活性。E. coli dnaK756...

基于Escherichia coli的互补实验用于研究热休克蛋白70的分子伴侣功能

体内组装是一种不依赖连接酶的克隆方法，该方法依赖细菌内在的DNA修复酶通过同源重组将DNA片段组装在一起。该方案既节省时间又降低成本，所需试剂很少，且克隆效率可高达99%。...

使用 体内 高效质粒构建组装

本文介绍了一种在C41(DE3)表达系统中过表达重组Nsp15（一种具有毒性的核酸酶）的方法，随后通过亲和层析和尺寸排阻层析纯化带标签的蛋白。这些方案可适用于其他难以表达的毒性蛋白。...

过表达并纯化一种来自 Escherichia coli 的毒性核酸酶

从大肠杆菌中纯化质粒DNA是分子克隆的核心技术。小规模纯化（质粒小提）通常从少于5...

使用Qiagen质粒小提试剂盒从细菌菌落中纯化质粒DNA

本研究展示了如何在染色体水平上形成RNA/DNA杂交体，并揭示遗传信息从RNA向酵母细胞基因组DNA的转移过程。...

利用含RNA寡核苷酸转化法在基因组DNA中生成RNA/DNA杂交体

我们介绍了一种利用二维琼脂糖凝胶分析来鉴定紫外线照射后产生的复制中间体结构的实验方法。...

紫外线诱导的复制中间体的可视化 E. coli 使用二维琼脂糖凝胶分析

本方案为从大肠杆菌（E. coli）培养物中高效并行进行裂解液澄清和质粒DNA纯化提供了一种经济有效的替代方法。AcroPrep...

从原核培养物中简化质粒DNA纯化流程

本文演示了一种针对特定目标序列构建随机突变文库的简单方案。我们展示了该方法如何在大肠杆菌（Escherichia...

在 E. coli 中进行蛋白质定向进化的诱变与功能筛选方案

学习热休克法转化质粒DNA到大肠杆菌的技术，用于分子生物学和基因工程研究。该方法通过42摄氏度热激处理提高细胞膜通透性，实现外源DNA高效导入，为后续斑马鱼发育生物学实验奠定基础。

使用热激法将质粒DNA转化至大肠杆菌

探索更多视频