热休克法转化到大肠杆菌质粒DNA

大家好，我是 Alex Hoge。我在加州大学尔湾分校生理学和生物物理学系的健身房霍尔实验室工作。今天，我将向您展示如何通过每次电击的方法转化电活性大肠杆菌。

所以今天我使用这项技术用我的 lation 产品转化大肠杆菌，因为我正在研究在斑马鱼中进行一些整体挂载。好了，我们开始进行转换。所以首先你需要让你的水浴或干巴士达到 42 度。

你需要把刚从主城带出来的细菌放在冰里。今天，我们使用来自 ities 的电能力细胞以及您在冰中的 DNA。此外，您还需要在室内温度或 37 温度下的 SOC 培养基管以及 LV 加抗生素培养基板。

所以现在我要添加细菌的 DNA。所以我在火焰旁边工作，以免污染细菌。所以我添加了细菌。

它是 50 微升的细菌，然后立即回到冰中，您可以轻弹一下以混合细菌和您的 DNA，然后在冰中放置长达 15 分钟。所以现在 15 分钟过去了，我们准备进行热休克，即将细菌置于 42 度 45 秒。所以我直接将试管从 42 度设置、30 度计时器 45 秒时从冰中取出，然后我会非常快速地将它们放回冰中，然后将它们从 42 度中直接放在冰上。

然后我们等待两分钟。所以现在我要把 SOC 培养基添加到细菌中，将它们放在 37 度 30 分钟。所以我吸了 500 微升 SOC 介质，然后将其放入细菌中，然后将它们放在我的临时小室中。

因此，如果您打算将 eend 管和临时腔室用于培养箱，请确保将 eend 管水平放置，因为它们会更好地摇晃。所以现在我们准备好将试管放入摇床中。这就是为什么我们让这个小房间在 37 度下放置 30 分钟。

所以现在我们已经完成了 37 度的孵育，我们将用 lb 加抗生素接种细菌。所以就我而言，它是氯醛。所以 I 每个样品 50 微升，然后放在板上。

因此，将剩余的 500 微升放在一个小桌面上旋转，一些垃圾可以去除细菌。因此，在分解后，我们得到了一个很好的沉淀，我们现在要做的是去除几乎所有的 SOC 培养基，只留下 50 微升，然后我们可以接种这 50 微升的浓缩细菌。所以我付了大约 450 微升。

我就留下这么多。所以现在我要将托盘悬挂在 SOC 介质剩下的 50 微升中。之后，我可以将这 50 μL 的样品接种到另一个板上。

所以我抗拒每个托盘，然后纵它并装盘它。所以每个样品最后会有两个板。所以现在我们必须将细菌传播到 LB 板上。

所以我将使用一些高压釜玻璃珠，但您也可以使用一根管道，像这样塑造成吊具。所以我要在培养皿上放一些珠子。我喜欢。

嗯，10 15.因此，在添加珠子后，您将所有盘子像这样堆成一堆，然后轻轻摇晃它们，让珠子将细菌均匀地传播到盘子上的各处。所以当我移动盘子直到它们干燥时。

因此，这意味着当您与珠子一起移动时，您不应该看到大块的液体条纹。例如，在那个盘子中，珠子往往会塌陷在一起，并看到很多条纹。那是汗水，珠子自由移动，那是干的。

所以现在板子是干的，所以我们可以丢弃珠子。所以我就这样拉动，这样你就可以回收它们了。所以现在我们要将板放在 37 度的培养箱中过夜，在 37 度孵育 12 小时后，您将板倒置，我们将板从培养箱中取出。

正如我们所看到的，我将其接种 50 μL 的板中的菌落比我接种其余部分的板中的菌落少。转化细菌时，重要的是在平板上拥有适量的菌落、正确的密度。所以在这个地方，你的菌落很少，但如果你想要更多的菌落，你可以在这个板中举个好例子，它的密度恰到好处，每个板大约 100 个菌落。

这个板就是一个很好的例子，因为菌落太多了，你不能选择单独的菌落。所以我刚刚向您展示了如何通过每次转化来转化大肠杆菌。所以这种技术非常重要的方面是在冲击之前保持所有东西或冰冷。

然后是正常 45 秒，在 42 度回到冰中时更多。然后其他所有东西都必须处于温暖的温度或 37 度。所以现在我要通过 PCR 筛选来筛选我的菌落。

所以其中一个重点也是要有两个板。所以第一，我们预计会有很多菌落，而那些菌落会更少。重要的是使用珠子或管道通过，让您的板子非常干燥。

感谢您的观看，祝您确认好运。