Name: 一个悬重系统使用隔离肾动脉闭塞 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 54 s
Description: 了解使用悬重系统诱导小鼠肾动脉闭塞以建立急性肾损伤模型的方法。该技术通过FITC菊粉清除率评估肾小球滤过率，为研究肾脏缺血及开发治疗策略提供可靠工具。

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本研究得到了美国国立卫生研究院基金资助 R01-HL092188、R01-DK083385 和 R01HL098294，以及麻醉教育与研究基金会（FAER）向 HKE 提供的基金、FAER 向 JYD 提供的基金，以及德国研究基金会（DFG，Deutsche Forschungsgemeinschaft）向 AG 提供的研究奖学金（GR2121/1-1）的支持。

一般注意事项。 所有操作均应在直立式解剖显微镜（Leica）下进行，并使用外科凝固器。实验组小鼠应在年龄和体重上相匹配，以确保结果的可比性。实验过程中应保持并监测体温、血压、麻醉和液体输注的稳定性。
1. 麻醉与手术
<ol>
	<li>肾脏缺血实验可采用双侧肾脏同时施加缺血与再灌注的方法，或在单侧肾切除术后对残留肾脏进行缺血处理。由于双侧肾脏同时缺血处理存在技术难度更高、实验设置更复杂以及手术时间更长等问题，我们将先进行右肾切除术，随后利用悬挂重物系统对左侧残留肾脏实施缺血处理。我们此前也使用该悬挂重物系统进行心脏冠状动脉阻断。然而，操作过程有所不同，因为肾动脉可从周围组织中分离，而冠状动脉则位于心肌内部。</li>
 <li>小鼠（8–14 周龄，性别不限）将以 70 mg/kg 剂量的戊巴比妥钠进行麻醉，并以约 10 mg/kg/h 的戊巴比妥钠维持麻醉。过量使用可显著降低血压，从而影响实验结果。在初期研究中，我们也曾使用氯胺酮和赛拉嗪，但这些化合物会引起明显的心动过缓（心率约 150 次/分钟）。除观察到心动过缓外，还有证据表明这两种药物在缺血条件下参与了保护机制。挥发性麻醉剂同样不可使用，因其可诱导肾脏保护效应并导致低血压。因此，我们最终选择戊巴比妥钠作为麻醉剂。此外，氯胺酮和赛拉嗪主要经肾脏排泄，肾切除和缺血可能延长氯胺酮的麻醉作用。</li>
 <li>当痛觉反射消失（通过镊子夹捏脚趾测试）后，将小鼠置于温控加热台（RT，Effenberg，慕尼黑，德国），以维持体温在 37.0°C，并呈左侧卧位。</li>
 <li>使用胶带将小鼠的下肢和上肢固定于手术台上。</li>
 <li>对于非存活手术（如视频演示所示），在切口区域涂抹矿物油，以防止皮肤切开时吸入鼠毛，从而避免鼠毛过敏风险。对于存活实验，则需采用规范的无菌技术，包括剃毛、使用碘伏（如 Betadine）对皮肤进行消毒、无菌操作灭菌器械，以及外科医生佩戴口罩和无菌手套。存活手术中不使用矿物油，而使用无菌 NaCl。</li>
 <li>使用剪刀和凝固电极（Erbe，ICC50，德国）进行右侧腰部切口，以防止肌肉和皮肤血管出血。与经腹正中切口进入腹腔的方法不同，该技术无需进入腹膜腔。</li>
 <li>使用 4/0 蚕丝缝线结扎肾蒂（包括肾动脉和肾静脉），并用剪刀切除右肾，注意避免损伤肾上腺血管。</li>
 <li>使用 4/0 缝线连续缝合肌肉壁和皮肤（两针）关闭手术切口。</li>
 <li>随后将动物置于右侧卧位，并进行左侧腰部切口。</li>
 <li>小心地将左肾从结缔组织中分离，避免损伤肾上腺及其血管。</li>
 <li>接着，将肾脏腹侧朝下翻转并置入丙烯酸杯中。对于存活手术，丙烯酸杯应进行灭菌处理。用镊子夹住周围组织，将肾脏极部小心推入丙烯酸杯内，再用镊子进一步轻柔推入。使用浸有 37.0°C 水的湿棉签保持肾脏湿润和温暖。</li>
 <li>在暴露左肾并将其置入丙烯酸杯后，将肾脏固定器在腹侧固定，以对肾血管施加张力。充分固定对成功将缝线置于肾动脉下方至关重要。随后固定肾脏固定器，肾动脉即可清晰辨认，因其位于肾静脉上方走行。</li>
 <li>使用精细镊子从邻近组织中分离肾动脉，位置靠近其从腹主动脉发出的起始处。在最顶端使用弯头镊子将动脉从下方静脉中分离。</li>
 <li>使用一把镊子作为引导，将 8/0 蚕丝缝线（Ethicon，Norderstedt，德国）置于肾动脉下方。该技术可仅阻断肾动脉血流，而不压迫肾静脉，与夹闭肾蒂的方法相比更具优势。</li>
 <li>将缝线绕过一小杆（可使用经处理的安全别针），并在两端各悬挂约 1 g 的重物（Eppendorf 管）。可通过向 Eppendorf 管中加水或减水来调节重物重量以适应肾脏大小。但应使动脉轻微上提，确保无血流通过动脉，同时避免对动脉施加过大牵拉。过度牵拉可能导致血管壁损伤，引起动脉壁增厚并影响再灌注效果。</li>
 <li>当重物未被支撑时，肾动脉立即被阻断；而当重物被支撑时，器官血流立即恢复。成功阻断可通过颜色由红变白来确认。</li>
 <li>可根据实验需求设定不同的缺血时间。完全再灌注的程度取决于缺血持续时间。缺血时间不超过 45 分钟时，可导致可逆性肾损伤。在我们的实验设置中，采用 20 至 30 分钟的缺血时间，造成中等程度的肾损伤，以便根据小鼠品系和处理方式观察肾损伤的改善或加重情况。</li>
 <li>完全再灌注后，可将肾脏从丙烯酸杯中复位。此时解除肾脏固定器的固定，释放对肾脏的张力。用钝头镊子轻轻将头侧极部从杯中取出，尾侧极部随之脱出。</li>
 <li>解除小鼠固定胶带（胶带），并将小鼠置于仰卧位，以进行如 FITC-菊粉清除率测定等操作。</li>
 <li>在部分实验中，可在整个手术过程中持续记录血压和心率。血压通过颈动脉导管连续测量。简言之，通过钝性分离气管旁肌肉暴露颈动脉。进一步暴露并小心避免组织损伤（特别是迷走神经），使用两根缝线和小夹钳将导管插入血管。血压使用 Statham 压力传感器（WK 280，WKK，Kaltbrunn，瑞士）测量。</li>
 <li>为进行 FITC 标记菊粉清除率测定，需将导管插入左颈静脉，用于输注氯化钠和 FITC 标记菊粉。此外，还需插入膀胱导管，以按时间顺序收集尿液，具体方法如下文详述。</li> 
</ol>
2. 肾损伤的检测
<ol>
	<li>一般建议：以下结果参数可用于评估肾缺血后的肾脏损伤： 采用荧光素异硫氰酸（FITC）标记的菊粉清除率测定法评估肾小球滤过率（GFR）。作为替代方法，可在肾损伤后24小时通过代谢笼实验测定肌酐清除率和血清肌酐水平。在肾缺血后24小时进行肾脏H&amp;E染色及髓过氧化物酶（MPO）ELISA检测，以评估肾脏损伤和炎症程度。</li>
 <li>代谢笼实验：
 	<ol>
 <li>缺血操作后，将左肾复位至腹膜后位置，并按上述方法缝合切口。</li>
 <li>手术结束后，小鼠腹腔注射0.3 ml生理盐水，并在加热灯下恢复2小时。</li>
 <li>随后将小鼠放入代谢笼（Tecniplast Deutschland, Hohenpeissenberg, Germany）中，连续进行两次24小时的肾功能参数测定。</li>
 <li>每只小鼠的饮水量需通过称量供水前和供水24小时后的空瓶与满瓶重量来确定。同时需记录小鼠体重。</li>
 <li>24小时后，在短时间异氟烷麻醉下，通过毛细管从眼球后静脉丛采集约75μl血液。</li>
 <li>在肾缺血后24小时，采用商用比色法（LT-SYS, Labor + Technik, Berlin, Germany）按照制造商说明书测定血浆和尿液中的肌酐浓度，以评估肾功能。使用火焰发射光度计（ELEX 6361, Eppendorf AG, Hamburg, Germany）测定血浆和尿液中Na+、K+的浓度。肾排泄和血流动力学参数通过标准公式15-17计算得出。</li>
 
 </ol>
 </li>
 <li>菊粉清除率：在肾缺血后进行FITC-菊粉清除实验。
 	<ol>
 	<li>对左侧颈静脉进行插管以实现持续输注。使用解剖剪刀（Dumont, WPI）将静脉从周围组织中分离后，在静脉上打两道结（4/0）。在近端结扎线前方夹住静脉以阻断血流。随后结扎远端线结，并将一重物挂于远端缝线末端，以对静脉施加张力。此步骤至关重要，有助于导管顺利插入静脉。使用显微剪刀在静脉上剪开一小口，用精细镊子（Dumont, WPI）固定切口，将导管插入静脉。推进导管时移除夹子，确保导管无张力，以便无需手持即可顺利置入。随后在静脉和导管上方打紧第二道近端结扎线。</li>
 <li>在膀胱中放置导管以进行定时尿液收集。为此，在膀胱上方皮肤做一小切口，小心将膀胱经皮肤切口拉出，用湿润纱布固定。在膀胱上预先放置一道缝线（4/0）。</li>
 <li>截取一段短导管（1.5 cm），加热一端使其形成环状结构，便于在膀胱内固定导管。</li>
 <li>在膀胱顶端剪开一小孔，注意在血管之间操作以避免出血。将导管较粗的一端插入膀胱，并在导管和膀胱上方收紧缝线固定。</li>
 <li>所有小鼠均接受一次静脉推注，注射0.85%氯化钠溶液，剂量为体重的20%。持续输注速率维持在800 μl/h/25 g体重，并在输注液中加入FITC-菊粉，用于评估全肾肾小球滤过率（GFR）。动物稳定20分钟后，进行四次20分钟定时尿液收集，以测定尿流速率和FITC-菊粉浓度。每次收集时段的中点采集血液样本，用于测定FITC-菊粉浓度。</li>
 <li>开始每次20分钟收集时使用计时器。将膀胱导管末端插入小型Eppendorf管中收集尿液。在收集前后称量Eppendorf管重量，以确定尿量。在每次收集时段的中点，通过毛细管从眶后静脉丛采集血液样本。</li>

 </ol>
 
 
 </li>
 <li>每次实验操作后可采集血液和肾脏组织，用于进一步分析，例如MPO ELISA、细胞因子ELISA、组织学检查等。</li>
 
</ol>
3. 典型结果：


<img src="/files/ftp_upload/2549/2549fig1.jpg" alt="肾脏血流示意图；标注肾动脉和肾静脉；展示血液循环路径。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
图1. 用于肾缺血的悬挂重物系统的模型：已建立一种悬挂重物系统以诱导左侧肾脏的肾缺血。因此，将一根8.0尼龙缝合线置于肾动脉下方，并在每根缝合线的末端悬挂一个小重物（1 g）。该实验设计通过施加和解除重物负荷，实现肾动脉的可逆性阻断。

<ol><li>Abuelo, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normotensive+ischemic+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Normotensive ischemic acute renal failure.</a> N Engl J Med. 357, 797-805 (2007).</li>
<li>Thadhani, R., Pascual, M., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Acute renal failure.</a> N Engl J Med. 334, 448-460 (1996).</li>
<li>Lameire, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Clin%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of acute renal failure.</a> Crit Care Clin. 21, 197-210 (2005).</li>
<li>Gelman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+aortic+cross-clamping+and+unclamping%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of aortic cross-clamping and unclamping.</a> Anesthesiology. 82, 1026-1060 (1995).</li>
<li>Yalavarthy, R., Edelstein, C. L., Teitelbaum, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+renal+failure+and+chronic+kidney+disease+following+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Hemodial+Int%22%5BJournal%5D)">Acute renal failure and chronic kidney disease following liver transplantation.</a> Hemodial Int. 11, Suppl 3. S7-S12 (2007).</li>
<li>Schrier, R. W., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+renal+failure+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Acute renal failure and sepsis.</a> N Engl J Med. 351, 159-169 (2004).</li>
<li>Grenz, A., Osswald, H., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Reno-Vascular+A2B+Adenosine+Receptor+Protects+the+Kidney+from+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Reno-Vascular A2B Adenosine Receptor Protects the Kidney from Ischemia.</a> PLoS Medicine. 5, e137-e137 (2008).</li>
<li>Grenz, A., Zhang, H., Hermes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+E-NTPDase1+%28CD39%29+to+renal+protection+from+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Contribution of E-NTPDase1 (CD39) to renal protection from ischemia-reperfusion injury.</a> FASEB J. 21, 2863-2873 (2007).</li>
<li>Grenz, A., Zhang, H., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+ecto-5%27-nucleotidase+%28CD73%29+in+renal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Protective role of ecto-5'-nucleotidase (CD73) in renal ischemia.</a> J Am Soc Nephrol. 18, 833-845 (2007).</li>
<li>Akcay, A., Nguyen, Q., Edelstein, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mediators+of+inflammation+in+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Mediators of inflammation in acute kidney injury.</a> Mediators Inflamm. , 137072-137072 (2009).</li>
<li>Faubel, S., Ljubanovic, D., Poole, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+CD4+T-cell+depletion+is+not+sufficient+to+prevent+ischemic+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Peripheral CD4 T-cell depletion is not sufficient to prevent ischemic acute renal failure.</a> Transplantation. 80, 643-649 (2005).</li>
<li>Wei, Q., Bhatt, K., He, H. Z., Mi, Q. S., Haase, V. H., Dong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+deletion+of+Dicer+from+proximal+tubules+protects+against+renal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Targeted deletion of Dicer from proximal tubules protects against renal ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 21, 756-761 (2010).</li>
<li>Joo, J. D., Kim, M., Horst, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+delayed+renal+protection+against+renal+ischemia+and+reperfusion+injury+with+A1+adenosine+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Acute and delayed renal protection against renal ischemia and reperfusion injury with A1 adenosine receptors.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 293, F1847-F1857 (2007).</li>
<li>Grenz, A., Eckle, T., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+hanging-weight+system+for+isolated+renal+artery+occlusion+during+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Use of a hanging-weight system for isolated renal artery occlusion during ischemic preconditioning in mice.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 292, F475-F485 (2007).</li>
<li>Qi, Z., Whitt, I., Mehta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+determination+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+mice+using+FITC-inulin+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 286, 590-596 (2004).</li>
<li>Lorenz, J. N., Gruenstein, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+nonradioactive+method+for+evaluating+single-nephron+filtration+rate+using+FITC-inulin%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin.</a> Am J Physiol. 276, 172-177 (1999).</li>
<li>Lorenz, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+evaluating+cardiovascular%2C+renal%2C+and+pulmonary+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">A practical guide to evaluating cardiovascular, renal, and pulmonary function in mice.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 282, 1565-1582 (2002).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

综上所述，本研究介绍了一种利用悬挂式砝码系统阻断肾动脉，在小鼠模型中实施肾缺血的新型技术。事实上，该方法可产生高度可重复的损伤，从而最大限度地减少因夹闭肾蒂所导致的变异性。

<table><tbody><tr><td>戊巴比妥钠</td><td>Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd</td><td>V.P.L. 9372</td><td>4mg/mL 生理盐水溶液</td></tr><tr><td>丝线缝合线 4.0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>517698</td><td></td></tr><tr><td>普罗林缝合线 8.0</td><td>Ethicon Inc.</td><td>M8739</td><td>可重复使用</td></tr><tr><td>解剖显微镜</td><td>Leica Microsystems</td><td>n/a</td><td>建议选择工作距离较大的型号</td></tr><tr><td>加热台</td><td>Rt, Effenberger, Germany</td><td>n/a</td><td>唯一供应商</td></tr><tr><td>外科手术器械</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td>精细微血管剪刀</td></tr></tbody></table>

使用悬挂式负重系统进行孤立肾动脉阻断

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

在住院患者中，超过50%的急性肾损伤（AKI）病例由肾缺血引起1-3。最近一项针对住院患者的研究显示，血清肌酐水平仅轻度升高（0.3至0.4 mg/dl）即与无升高者相比，死亡风险增加70%以上1。与此类似，需要主动脉和肾血管交叉阻断的外科手术，其术后肾衰竭发生率可高达30%4。同样，在常规情况下，超过10%的患者在心脏手术后会发生AKI，并伴随死亡率显著上升。AKI也是肝移植术后常见的并发症。至少有8-17%的患者最终需要接受肾脏替代治疗5。此外，肾移植过程中由于肾小管细胞损伤导致的移植肾功能延迟恢复，常与缺血相关性AKI有关6。此外，约20%的脓毒症患者会发生AKI6。AKI的发生与发病率和死亡率的显著升高密切相关1。目前可用的治疗手段极为有限，且大多数针对AKI的干预性临床试验在人体中均未成功。因此，迫切需要开发新的治疗策略以预防缺血所致的肾损伤3, 7-9。
为了阐明缺血所致肾损伤的机制及可能的治疗策略，迫切需要使用小鼠模型7-13。小鼠模型可利用多种遗传学工具，包括基因靶向小鼠和组织特异性基因靶向小鼠（cre-flox系统）。然而，小鼠肾缺血模型在技术上具有挑战性，实验细节对结果影响显著。我们对一种新型的小鼠肾动脉孤立性阻断模型进行了系统性评估，该模型特别避免了对肾蒂进行夹闭或缝合的操作14。由于实验设计限制，该模型需预先切除右肾，以便仅在单侧肾脏实施缺血操作。实际上，通过采用悬垂式负重系统，整个手术过程中仅需对肾动脉进行一次操作。此外，该技术不会造成静脉或尿道的阻塞。我们通过检测血清肌酐水平，证实该模型可产生具有时间-剂量依赖性且高度可重复的肾损伤。进一步与传统的全肾蒂夹闭模型相比，该新模型中缺血预处理所介导的肾脏保护作用更为显著且结果更可靠。因此，这一新技术可能对从事急性肾损伤研究的其他研究人员具有应用价值。

由于缺血导致的急性肾损伤（AKI）的精确小鼠模型是研究急性肾损伤并可能发现治疗肾脏损伤方法的重要工具。悬挂重物系统提供了一种可立即、可靠地实现肾动脉闭塞和再灌注的工具，且不会引起肾充血。

在住院患者中，超过50%的急性肾损伤（AKI）病例由肾缺血引起1-3。一项针对住院患者的近期研究……

本实验的总体目标是通过在小鼠中诱导缺血来研究急性肾损伤。首先通过切除并移除右侧肾脏来实现这一目标。第二步是将肾脏进行准备后放入亚克力杯中。接下来，将悬挂重物系统应用于离体肾动脉以诱导缺血。最终，可通过FITC-菊粉清除率测定肾功能，获得显示缺血后肾损伤减轻或加重的结果。这种用于诱导肾缺血的悬挂重物系统有助于回答缺血所致急性和慢性肾损伤领域的关键科学问题。本次操作将由来自宾夕法尼亚大学的医学生 Alexander Barla 和本课题组的研究助理 Douglas Ard 演示。Alexander Barla 今年在本实验室开展肾脏损伤的相关研究。虽然可以同时对双侧肾脏进行肾缺血处理，但此处演示一种较为简便的方法：先切除右侧肾脏，再对剩余的左侧肾脏进行缺血处理。首先，将麻醉后的动物置于加热的手术台上，保持左侧卧位。用胶带将动物的下肢和上肢固定在手术台上。清洁皮肤，并在切口区域覆盖矿物油，以防止吸入小鼠毛发并减少过敏原暴露。在右侧腰部的皮肤上做一切口，使用凝固电极切开肌层以防止出血。用丝线结扎肾蒂，包括肾动脉和肾静脉。使用剪刀切除右肾，注意避免损伤肾上腺血管。使用缝线缝合肌层，然后缝合皮肤。第一个伤口缝合完毕后，将动物置于右侧卧位。在左侧腰部做一切口，暴露并观察左肾。小心地将左肾从结缔组织中分离出来，避免损伤肾上腺和血管。下一步是将肾脏腹侧朝上放入一个有机玻璃杯中。操作时，用镊子夹住周围组织，同时小心地将肾脏的下极推入杯中。接下来，使用镊子将肾脏的上极推入杯中。在整个操作过程中，使用浸有37摄氏度生理盐水的棉签保持肾脏湿润和温暖。当肾脏放入杯中后，从腹侧固定肾夹持器。为保持肾血管的张力，固定肾夹持器，使肾动脉位于肾静脉上方并易于识别。使用精细镊子将肾动脉从周围邻近组织和血管中分离出来。小心地将动脉与下方走行的静脉分离。接下来，使用镊子将一根7-0丝线穿过肾动脉下方。作为参考，将约1克重的重物分别系在丝线的两端，并将丝线的两端搭在一根小杆上。当重物自由悬挂时，肾动脉应被阻断。 成功阻断的标志是颜色由红色变为苍白。缺血持续时间将根据研究而定。此处，缺血期为30分钟，之后移除重物，并允许再灌注时间为30至60分钟。再灌注后，松开肾夹持器的张力，轻柔地将肾脏从杯状器械中移出并放回动物体内。为评估肾损伤程度，可在肾缺血一小时后，通过测定荧光素标记的菊粉（FITC inulin）清除率来评估肾小球滤过率。第一步是插管左侧颈静脉，用于持续输注氯化钠和荧光素标记的菊粉。在完成如前所述的动物准备后，沿颈部做一切口。从周围组织中分离出深蓝色的静脉。在静脉上相距约一厘米处，用4-0缝线结扎两道。在近端结扎线之前放置血管夹，以阻断血流。接下来，结扎远端结并在线的远端放置一个重物，以维持静脉内的张力，使用显微剪刀在静脉上剪开一个小口。用精细镊子夹住切口，同时插入导管，松开夹子以进一步推进导管。导管到位后，结扎第二根近端缝线，将其固定于静脉和导管之上，以安置膀胱导管用于定时尿液收集。首先，切开膀胱表面的皮肤。接着，小心地通过切口将膀胱拉出。分离后，用湿纱布固定膀胱，并在其上方放置一段缝线。剪取一段约1.5厘米长的导管，加热其中一端以使边缘光滑，便于插入。在膀胱周围放置缝线，然后在膀胱顶部血管之间剪一个小孔，以防止出血。将导管的光滑端插入膀胱，并收紧缝线，将导管和膀胱一并结扎固定。导管放置到位后，维持持续输注速率为每小时每25克体重800 µL。输注液中加入荧光素异硫氰酸酯标记的菊粉（FITC inulin），用于评估全肾肾小球滤过率。动物稳定20分钟后开始采集样本，之后每隔20分钟收集一次尿液，将膀胱导管末端插入小型离心管中以收集尿液，共采集四次。记录采集前后试管的重量。为了确定尿液的量，可在每个时间段的中期通过眶后静脉丛采血，测定FITC-菊粉含量，以此作为直接插管法测定菊粉清除率的替代方法；也可使用代谢笼测定肌酐清除率和血清肌酐。在肾损伤恢复后，将小鼠放入代谢笼中以评估肾功能。24小时参数：将每个水瓶放入笼子前先称重。该重量将用于后续确定研究期间消耗的水量。称量水瓶重量，并用初始重量减去该重量以计算消耗的水量。可在缺血后不同时间点检测血浆和尿液中的肌酐、钠和钾水平，以评估肾功能。通过该实验步骤，可检测细胞因子水平，以揭示急性肾缺血后炎症反应的程度。

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一个悬重系统使用隔离肾动脉闭塞

一种用于研究心肌缺血及缺血预处理的心脏保护机制的小鼠模型是一项重要工具 体内. 本文报道了一种易于应用的 原位...

使用悬挂重物系统实现小鼠冠状动脉闭塞

我们建立了一种用于门静脉三联体阻断的新型小鼠悬挂重物系统模型。该技术可能对未来研究小鼠肝脏缺血模型具有重要价值。...

使用悬挂重物系统实现小鼠肝脏缺血

本视频演示了在血管紧张素II诱导的高血压小鼠模型中，采用苯酚破坏肾动脉交感神经功能以降低血压的操作步骤。...

肾动脉交感神经去神经术在血管紧张素II诱导的高血压小鼠模型中的应用

介绍了一种通过手术切除Lewis大鼠5/6肾质量来建立慢性肾脏病（CKD）的两阶段方法。结合手术操作、一氧化氮合酶（NOS）抑制和高盐饮食，可建立模拟人类慢性肾脏病的动物模型，用于研究其致病机制并开发新的治疗干预手段。...

联合5/6肾切除术、高盐饮食及一氧化氮合酶抑制在Lewis大鼠中诱导慢性肾脏病

酶法微电极生物传感器能够实时检测生物相关浓度下的细胞外信号分子。以下方案将生物传感器的应用扩展到肾脏中三磷酸腺苷（ATP）和过氧化氢（H2O2）的离体（ex vivo）和在体（in...

使用酶生物传感器定量肾脏内源性ATP或H2O2

小鼠离体灌注肾（MIPK）是一种用于维持小鼠肾脏在离体状态下 离体...

小鼠离体灌注肾脏技术

采用聚氨酯管建立了一种改良的双肾单夹（2K1C）Goldblatt小鼠模型，以诱发肾动脉狭窄，从而引起肾素表达升高和肾脏损伤。本文详细描述了制备套管并将其放置于肾动脉上的操作步骤，以构建可重复且稳定的2K1C小鼠模型。...

一种改良的两肾一夹小鼠模型用于研究肾动脉狭窄中的肾素调节

本研究介绍了一种高度可重复的猪肾缺血-再灌注损伤大动物模型，通过经皮双侧肾动脉球囊导管临时阻断60分钟，随后再灌注24小时建立。...

通过暂时性双侧肾动脉阻断建立急性肾损伤的大动物模型

本研究建立了一种针对双侧肾缺血-再灌注小鼠模型的技术优化方案，用于急性肾损伤研究。...

急性肾损伤研究中双侧肾缺血-再灌注小鼠模型的技术优化

本文提供了详细的实验操作指南，使研究人员能够采用一种标准化的模型，在小鼠中实施可逆的单侧输尿管梗阻，从而在长期输尿管梗阻解除后，分析其结构与功能的长期变化结果。...

评估长期单侧输尿管梗阻解除后结构与功能长期转归的小鼠模型

本文介绍了一种用于分离和功能评估人肾动脉分支的逐步实验方案，可促进药物开发的临床前研究。...

人类肾动脉分支的多层级显微解剖与功能-结构分析

了解使用悬重系统诱导小鼠肾动脉闭塞以建立急性肾损伤模型的方法。该技术通过FITC菊粉清除率评估肾小球滤过率，为研究肾脏缺血及开发治疗策略提供可靠工具。

使用悬挂式负重系统进行孤立肾动脉阻断

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