一个1.5小时的程序，鉴定肠球菌直接从血培养的物种

该程序的总体目标是使用肽核酸荧光和 C 2 杂交从阳性血培养瓶中快速鉴定肠球菌种类。一旦制备了血培养物并进行了革兰氏试验以确认存在肠球菌培养物，将样品固定在 PNA 鱼显微镜载玻片上。然后将载玻片与目标生物体特异性的 PNA 探针一起孵育。

探针杂交后，进行严格的洗涤以去除多余的非杂交探针。将封固介质添加到载玻片中，然后用盖玻片密封。样品中存在的肠球菌种类可以通过荧光显微镜鉴定。

该 PNA Fish 鉴定方案在为从麻痹中鉴定肠球菌提供了一种快速、特异性的方法方面是独一无二的。患者血培养样本 在 35 摄氏度的自动血培养仪器中孵育两个血培养瓶，一个是需氧瓶，一个是厌氧瓶，其中含有疑似脓毒症患者的静脉血。一旦设备指示它已检测到微生物生长，请取出瓶子，轻轻旋转血培养瓶以均匀地重悬细菌。

然后，使用无菌注射器和针头无菌地将每个瓶子中大约 5 毫升的血液转移到单独的螺旋盖管中。分配完所有标本后，使用无菌移液器将每支管中的一滴血转移到单独的玻璃显微镜载玻片上。让玻片风干约 15 分钟。

然后在载玻片完全干燥后，将载玻片浸入甲醇中以固定样品。玻片固定后，清洗它们并进行标准革兰氏染色，以确定每种血培养中存在的生物体的形态。使用带有油浸物镜的显微镜检查染色玻片。

进入核心群物种将表现为革兰氏阳性球菌，通常成对或短链组装。将一滴固定液放入 p 和鱼显微镜载玻片的孔中。轻轻混合要检测的血培养管。

然后将 10 微升培养物转移到固定液滴上，并上下管道以乳化样品。将玻片放在 55 摄氏度的加热板上 20 分钟，以固定每次测试中的涂片。确保包括阳性和阴性对照玻片以进行检测质量评估。

如果 e 老茧对照玻片可以从 Van DX 购买或使用参考培养物制备。涂片准备好后，将一滴 EFI 老茧 O-E-P-N-A 滴在含有血培养样品的孔上，以及阳性和阴性对照孔上。为避免探针原液污染，请确保不要让滴瓶尖端接触血涂片。

将盖玻片放在样品顶部，注意不要产生气泡。然后将玻片放在加热块上以 55 摄氏度孵育 30 分钟。为了让 PNA 在孵育后进行杂交，请将载玻片放在载玻片托架中。

将加载的玻片托架浸入装有预热 55 摄氏度洗涤液的染色皿中。从样品上去除多余的 PNA，并通过在缓冲液中搅动载玻片或使用镊子轻轻滑下盖玻片。将玻片在 55 摄氏度的洗涤液中孵育 30 分钟。

然后从染色皿中取出载玻片，让它风干。玻片干燥后，向玻片中加入一滴室温封固剂，并小心地将盖玻片放在样品上。制备后两小时内，使用双波段滤光片在荧光显微镜上检查载玻片。

使用这种方法，可以区分左侧绿色显示的 iffy、callous 和红色的 eum。在最右侧的中间面板中，是一个否定的结果。要获得成功的结果，需要记住的三件事是仪器温度必须保持在设定温度。

您需要严格按照包装说明书中概述的染色程序进行作。最后，您需要有一个经验丰富的读者并仔细阅读幻灯片。该方案有助于做出治疗肠球菌引起的脓毒症的治疗决策。

感谢您的观看，祝您的实验好运。