由运动神经元调制生理，形态学和神经化学的表征

描述量化哺乳动物在运动神经元在体内的生理反应和相关的神经元与神经元的形态，神经化学表型和突触的微型电路的生理的一种技术。

该程序的总体目标是记录单个神经元在运动过程中的生理反应，并进一步表征这些神经元的形态和神经化学。这是通过首先麻醉和手术准备动物来实现的。下一步是电生理学记录运动过程中单个神经元的细胞内反应。

在灌注动物并处理大脑后，最后一步是可视化和分析生理反应和神经元形态。最终，细胞内神经元记录、免疫化学和分析技术相结合，显示了运动过程中单个神经元膜电位的调节。与细胞培养等现有方法相比，该技术的主要优点是保留了神经元连接和突触输入，并且神经元没有自动化或放置在人工培养基中。在前一天，实验将神经元示踪剂（如辣根、过氧化物酶）注射到外周目标区域，以逆行标记运动神经元。

第二天麻醉大鼠并将其放在加热垫上，刮掉皮肤，使用无菌技术用动物剪刀覆盖后颅骨。沿着大腿内侧切开一个切口，将套管插入股静脉进行额外麻醉。将另一根套管插入股动脉以监测血压。

最后，将套管插入气管。接下来，将大鼠放入立体定位框架中。进行开颅手术以暴露小脑，小心避开位于顶骨和顶骨间交界处正下方的大静脉窦。

接下来，用温热的矿物油覆盖大脑表面。现在将下颌骨粘在耦合到电磁振动器的杆上。下颌骨的运动由信号发生器向振动器发送的命令信号控制。

接下来，在靠近开颅手术的皮肤下放置一个接地电极。为了准备细胞内电极，用 IDE 或四乙基棒 Domine 染料溶液测试填充微电极。对于大直径轴突，该电极阻抗为 60 至 80 兆欧姆，对于小传入轴突和神经元间，该电极阻抗为 80 至 150 兆欧姆。

接下来，使用固定在动物头部后面位置的小型望远镜将微电极放入静电计的头部阶段。通过望远镜的 20 x 封闭 redle 可视化微电极。目标区域约为距下丘下缘 0.5 毫米。

现在在 pia mater 上开一个小口，以便准确定位大脑表面。对电容反馈进行过度补偿，以便当电极接触大脑时，会产生反馈信号。推进电极，直到它进入大脑。

下一步是激活下颌骨的重复移位。然后使用步进电机，将电极推进到大脑中。当直流电位突然下降和持续的突触活动表明神经元穿刺时，停止推进电极。

当认为穿透稳定时，开始斜坡并保持和正弦下巴运动。记录神经元反应并根据其反应表征神经元。接下来，要绘制神经元的感受野，请使用钝探针探查头部和口腔内的皮肤。

探索神经元对其他刺激的反应，例如肌肉收缩或有害刺激。记录完成后，注入 1 到 4 纳安培的直流电流，总共注入 15 到 70 纳安培分钟。监测电极穿透并停止电流注入。

如果膜电位变为大于负 30 毫伏，下一步是切开脑组织。对动物实施安乐死并灌注后，取出大脑。然后在正面、矢状面或水平面上切割 50 到 100 微米的切片。

为了可视化标记的感觉神经元和各种运动神经元之间的关系，处理组织以获得 H-R-P-D-A-B 或德克萨斯红，具体取决于组织，可以使用荧光或共聚焦显微镜或使用定量共定位软件进行其他分析。根据需要，可以对突触素进行免疫化学处理，以准确定位标记神经元内的突触。该图显示了在电生理学表征后注射 IDE 的脑干神经元。

根据运动过程中的神经元反应，该神经元可以被识别为次级肌梭传入神经元。棕色轮廓表示三叉神经运动核的位置。该图显示了颌骨移位过程中感觉神经元的生理反应。

神经元的响应表示为瞬时发射频率。请注意，该反应与下颌骨位移非常相似，表明该特定神经元提供与下颌位置相关的感觉反馈。该图显示了在肌肉探查期间做出反应的感觉神经元。

免疫化学处理后，神经元用 ide 染色。表现为红色肿胀的突触棒与黄色突触素共定位。绿色是荧光导弹染色剂。

该图是来自肌梭初级传入神经元的轴突动画。标记神经元的多个光学切片用于生成动画。在此程序之后，可以执行其他方法，如电显微镜、共聚焦显微镜以及前级或逆行神经元标记，以回答有关神经递质与突触 BNS 和神经元连接的神经元共定位的神经元的超微结构特征的其他问题。