Name: 从老鼠血液通过大隐静脉和心脏穿刺 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 27 s
Description: 学习大鼠采血技术，掌握大隐静脉采血和心脏穿刺两种方法。这些技术适用于药代动力学研究，可在最小化动物痛苦的前提下获取血液样本，为神经科学和生理学实验提供可靠的采样手段。

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通过隐静脉和心脏穿刺法从大鼠采血
注意：所有操作步骤必须获得您所在机构动物护理与使用委员会的批准。
1. 从隐静脉采血
<ol>
<li>此操作无需麻醉，需要两人协作完成，一人固定大鼠，另一人进行采血。</li>
<li>用毛巾卷成锥形或佩戴啮齿类动物操作手套固定大鼠，使其中一条后肢暴露。</li>
<li>使用电动剃毛器剃除腿部后侧的毛发，直至隐静脉清晰可见。剃除足够大的区域，确保穿刺部位不接触毛发。可使用少量无香味的手部润肤露，防止未剃除的毛发进入穿刺区域。</li>
<li>在腿部根部施加压迫点，使隐静脉隆起（类似于从人类或大型动物采血时使用止血带的方法）。使用20G针头穿刺静脉，并用微量采血管收集流出的血液。通过腿部的轻微挤压动作可帮助获得更多血液。采集足够血液后，用干净的敷料按压穿刺部位以止血。</li>
</ol>
2. 通过心脏穿刺采血
<ol>
<li>该操作需要使用麻醉剂，且为终末性操作。心脏穿刺结束后必须立即对动物实施安乐死。</li>
<li>准备一支带有23G1针头的5 ml注射器。</li>
<li>对大鼠进行深度麻醉，并通过观察其是否缺乏自主运动、呼吸缓慢以及对刺激（如夹捏脚趾）无反应来确认麻醉效果。为确保麻醉持续有效，操作过程中可在大鼠鼻部放置一个内含浸有挥发性麻醉剂的纸巾的注射器筒。</li>
<li>将大鼠仰卧放置，头部背向操作者。</li>
<li>若为右手操作，将左手食指置于最低肋骨水平位置，不施加任何压力。心脏位于该点上方约1 cm处，稍偏右侧。</li>
<li>以45度角持注射器，将针头插入两根肋骨之间，观察是否有血液进入针头。若见到血滴，表明针头已进入心脏。保持注射器位置不动，拉动活塞使注射器充满血液。当注射器充满后，小心将其与针头分离，并将血液排入收集管中。随后可将同一注射器重新连接至针头以继续采血。通常可从一只120–180 g的大鼠中采集5–10 ml血液。</li>
<li>立即对大鼠实施安乐死。</li>
</ol>

<ol><li>Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sampling+from+the+retro-orbital+plexus%2C+the+saphenous+vein+and+the+tail+vein+in+rats%3A+comparative+effects+on+selected+behavioural+and+blood+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables.</a> Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).</li>
<li>Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collecting+blood+from+rodents%3A+a+discussion+by+the+laboratory+animal+refinement+and+enrichment+forum%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Technology+and+Welfare%22%5BJournal%5D)">Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum.</a> Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).</li>
<li>Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+two+methods+of+bleeding+rats%3A+the+venous+plexus+of+the+eye+versus+the+vena+sublingualis%5BTitle%5D)+AND+%22Jounal+of+Applied+Toxicology%22%5BJournal%5D)">A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis.</a> Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).</li>
<li>Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blockade+of+T+lymphocyte+K%2B+channels+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%2C+a+model+for+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad%22%5BJournal%5D)">Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis.</a> Proc. Natl. Acad. , 13942-13947 (2001).</li>
<li>Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+effector+memory+T+cells+with+a+selective+peptide+inhibitor+of+Kv1.3+channels+for+therapy+of+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases.</a> Mol. Pharmacol. , 1369-1381 (2005).</li>
<li>Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+channels+are+a+therapeutic+target+for+T+cell+mediated+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , 17414-17419 (2006).</li>
<li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blocking+of+voltage-gated+K%2B+channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. , 936-944 (2001).</li>
<li>Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+basic+protein-reactive+T+cells+induce+conduction+failure+in+vivo+but+not+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro.</a> Neuroreport. , 317-320 (2003).</li>
<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed+type+hypersensitivity+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li>
</ol>

从隐静脉采血是一种无需麻醉即可获取少量血液的便捷方法。如果需要多次采样，请查阅相关规定，确保从一只大鼠采集的血液量不超过允许限度。

通过心脏穿刺采血是一种获取大量血液的便捷方法，但该操作为终末性手术，采血结束后必须对动物实施安乐死。

这些技术（如同所有在活体动物上进行的技术一样）应首先在兽医或兽医技术人员的监督下进行，他们能够评估动物是否得到妥善处理，并确保动物不会遭受不必要的疼痛和/或痛苦。

<table><tbody><tr><td>20G 1/2 针头</td><td>工具</td><td>BD Biosciences</td><td>305176</td><td>用于穿刺隐静脉</td></tr><tr><td>Microvette 300</td><td>工具</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>20.1308.100</td><td>用于采集隐静脉血液</td></tr><tr><td>电动剃毛器</td><td>工具</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>CLP-32130</td><td></td></tr><tr><td>23G 1 针头</td><td>工具</td><td>BD Biosciences</td><td>305145</td><td>用于心脏穿刺</td></tr><tr><td>5 ml 塑料注射器，滑动接头</td><td>工具</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-12</td><td>用于心脏穿刺</td></tr></tbody></table>

通过隐静脉采血和心脏穿刺法从大鼠采血

Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture

从啮齿类动物采血对于大量体外和体内研究都是必需的。啮齿类动物的采血部位有很多：眶后窦、颈静脉、上颌静脉、隐静脉和心脏。每种技术都有其优缺点，且某些技术在一些国家已不再被批准使用（例如，荷兰已不再允许使用眶后窦采血）。关于不同采血技术的讨论可参见文献1-3。 
本文中，我们介绍两种从大鼠采血的技术，每种技术均有其特定的应用场景。
正确操作时，从隐静脉采血对动物造成的应激极小，且无需麻醉。该技术可用于多次采集少量血液，例如药代动力学研究4,5、血浆化学分析或血细胞计数6所需样本。
心脏穿刺可从单只动物采集大量血液（可从一只150克重的大鼠采集多达10毫升血液）。因此，当从隐静脉采血无法获得足够样本量时，该技术作为终末性操作非常有用。当需要从特定品系的大鼠获取足量血清以在体外培养T淋巴细胞系时，我们采用心脏穿刺技术4-9。

在大量研究中都需要进行采血，例如用于研究化合物的药代动力学特征。本文中，我们演示了两种从大鼠采血的技术：从隐静脉采血或经心脏穿刺采血。

从啮齿类动物采血是大量体外和体内研究的必要步骤。啮齿类动物的采血部位众多：……

大家好，我是Christine Beaton。我是加州大学欧文分校生理学与生物物理学系George Chen实验室的一名助理研究员。接下来的视频将由实验室的研究生Adriana Garcia协助您一起观看。我将向您展示两种从大鼠采血的技术。第一种技术是经由隐静脉采血。如果需要在不使用麻醉的情况下从大鼠采集少量血液，该技术非常实用。例如，如果你正在进行一项药代动力学研究，该研究需要在规律的时间间隔采集少量血液。接下来我们要向您展示的第二种技术是心脏穿刺采血法。这是一种终末性技术，因此在完成采血后必须处死大鼠。但这种技术的优势在于可以获得更多的血液，达到几毫升。因此，在我们确定好采血区域后，会涂抹普通的润肤霜，主要是为了防止毛发飞散进入采血管，同时也避免血液过早凝固。然后，我会用拇指施加一个压力点，使静脉稍微隆起，接着由Adriana进行静脉穿刺。有时静脉会滑动，导致穿刺失败，此时我们会再次穿刺。现在，我们已经刺破了静脉，血液会以规律的间隔滴出，因此我们用微量离心管收集这些血滴，并持续操作直至获得足够用于检测的血液，或直至不再有血液流出为止。根据大鼠个体的差异以及穿刺效果的好坏，从脑部获取的血量会有所不同。为了促使更多血液流出，我们可通过按压腿部来辅助。这是我们通常从外周静脉采血所获得的血量。现在我将向您演示如何进行穿刺操作。对于该操作，我们真正需要的只是一支5毫升的一次性塑料注射器和一根23号针头。因此，大鼠已通过异氟烷深度麻醉，我使用一个装有异氟烷并附有Kim擦拭纸的注射器作为面罩，以确保大鼠不会苏醒。我习惯用右手操作，因此用左手食指置于剑突部位以定位。随后，为找到心脏，我将注射器向上并向右稍移约一厘米，以大约45度角进针。如果针头位于心脏内，我应该能持续抽出血液。如果未进入心脏，则可以再深入一些或稍微向表面调整。采用这一技术，我应能从一只大鼠中采集数毫升的血液。当然，当心脏停止跳动时，血流也会同时停止。因此你需要让大鼠处于深度麻醉状态，但又不能让它死亡过快。当注射器抽满血液后，我将注射器与针头分离，把血液注入试管中，并缓慢地将试管放低，以避免溶血，因为之后我还需要使用血清进行组织培养，或用于稀释注射用的药物。由于我已将针头保留在原位，因此可以尝试查看是否能从同一只手继续抽取更多血液。同样，如果血流非常缓慢，比如现在这样，我会轻微上下移动针头，以寻找一个血量更充足的采血位置。当然，一旦找到合适的位置，就不要再移动针头了。我们刚刚向您展示了如何从大鼠的尾静脉或通过心脏穿刺采集血液。祝您的实验顺利成功。

drawing-blood-from-rats-through-saphenous-vein-cardiac

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

从老鼠血液通过大隐静脉和心脏穿刺"

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