Name: 可逆的胆汁淤积大鼠模型的建立 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-21T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: 学习建立可逆性胆汁淤积大鼠模型的显微外科技术，使用异氟烷麻醉和聚酯管进行胆道插管。该方法为研究胆汁淤积的生理病理变化提供了重要的实验工具。

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1. 大鼠胆道解剖
胆管的平均直径和长度分别为1 mm和29 mm。幽门与十二指肠乳头之间的平均距离为28 mm。有两条主要的胰管汇入胆管——前胰管开口于左侧，后胰管开口于右侧。除这些主胰管外，还有若干条副胰管，分别引流胰腺的三个部分，并直接开口于胆管。6 

2. 技术
所有动物实验均遵循美国国立卫生研究院关于伦理研究的指南，并经机构的研究委员会和动物护理委员会批准。本演示使用8周龄的雄性Sprague-Dawley大鼠。大鼠购自马萨诸塞州威尔明顿的查尔斯河实验室，体重均超过300克。大鼠可自由摄取标准实验室饲料，并在标准实验室条件下共同饲养。
大鼠首先用异氟烷进行麻醉，并在手术过程中通过面罩持续给予异氟烷以维持麻醉状态。从剑突开始做一条2 cm长的正中切口。切开筋膜后，使用Sen拉钩将肝叶向上方牵开，用棉签将十二指肠向尾侧牵开。胆管被识别为进入十二指肠的管状结构。将胆管轻度拉紧后部分切开。使用一根无菌的聚乙烯管，长5 cm，内径0.6 mm，外径0.9 mm。将该管的一端热封封闭，另一端轻轻斜面削尖。将斜面端插入胆管中，并在胆管切口的近端和远端均使用8-0尼龙缝线固定。剩余的导管连同封闭端一起置于腹腔内。手术区域用生理盐水冲洗。随后以两层方式关闭腹腔，使用4-0聚乙醇酸缝线。腹白线采用连续缝合，皮肤采用间断皮内缝合。皮肤表面再涂抹皮肤粘合剂。术后大鼠置于标准实验室条件下恢复，并每日监测体重，以确保充分的水化状态。
对于胆汁淤积逆转手术，按照先前所述方法使用异氟烷对大鼠进行麻醉。通过先前的切口位置打开腹腔。找到导管并将其从腹膜腔中取出。使用钝性与锐性分离技术松解导管周围的网膜粘连。随后在十二指肠上确定一个适合十二指肠造口管舒适放置的位置。使用8-0尼龙线缝合一个直径为2-3 mm的荷包缝合线。在该荷包缝合线内切开十二指肠。将导管的封闭端剪至适当长度，确保胆汁自由流通。将此端导管置入十二指肠内，并收紧荷包缝合线。用生理盐水冲洗腹腔后逐层关闭腹腔。
在之前的一项研究中，采用不同技术实施胆肠吻合术，大鼠存活了12周，且在此期间健康状况良好。此外，该研究证实，对胆管结扎2周的大鼠施行胆肠吻合术后，其生化和组织学改变得以逆转。7

<ol><li>Gouma, D. J., Roughneen, P. T., Kumar, S., Moody, F. G., Rowlands, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+nutritional+status+associated+with+obstructive+jaundice+and+biliary+drainage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Changes in nutritional status associated with obstructive jaundice and biliary drainage in rats.</a> Am J Clin Nutr. 44, 362-369 (1986).</li>
<li>Ohtsuka, M., Miyazaki, M., Kondo, Y., Nakajima, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-mediated+sinusoidal+endothelial+cell+injury+after+extensive+hepatectomy+in+cholestatic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-mediated sinusoidal endothelial cell injury after extensive hepatectomy in cholestatic rats.</a> Hepatology. 25, 636-641 (1997).</li>
<li>Abe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kupffer+cell-derived+interleukin+10+is+responsible+for+impaired+bacterial+clearance+in+bile+duct-ligated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Kupffer cell-derived interleukin 10 is responsible for impaired bacterial clearance in bile duct-ligated mice.</a> Hepatology. 40, 414-423 (2004).</li>
<li>Saiki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preoperative+internal+biliary+drainage+is+superior+to+external+biliary+drainage+in+liver+regeneration+and+function+after+hepatectomy+in+obstructive+jaundiced+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Preoperative internal biliary drainage is superior to external biliary drainage in liver regeneration and function after hepatectomy in obstructive jaundiced rats.</a> Ann Surg. 230, 655-662 (1999).</li>
<li>Subhas, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+methylprednisolone+on+warm+ischemia-reperfusion+injury+in+a+cholestatic+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Protective effect of methylprednisolone on warm ischemia-reperfusion injury in a cholestatic rat liver.</a> Am J Surg. 199, 377-380 (2010).</li>
<li>Kara, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomical+study+on+the+rat+pancreas+and+its+ducts+with+emphasis+on+the+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">The anatomical study on the rat pancreas and its ducts with emphasis on the surgical approach.</a> Ann Anat. 187, 105-112 (2005).</li>
<li>Ryan, C. J., Than, T., Blumgart, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choledochoduodenostomy+in+the+rat+with+obstructive+jaundice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Choledochoduodenostomy in the rat with obstructive jaundice.</a> J Surg Res. 23, 321-331 (1977).</li>
</ol>

无利益冲突声明。

胆汁淤积会导致胃肠道系统发生多种变化。已有研究探讨了胆汁淤积对免疫系统和营养状态的影响。1-3 胆汁淤积可能影响肝脏手术的预后。已有研究致力于改善存在胆汁淤积情况下肝脏手术的结局。4-5 随着医学和研究的进步，未来将开展更多关于胆汁淤积的研究。因此，建立一个良好的胆汁淤积模型十分必要。大鼠作为实验动物具有易获得、易操作、成本低以及适用于肝胰胆系统研究的稳定性等优势，因而被优先选用。6 本视频文章将演示构建一种可逆性胆汁淤积模型的方法，该模型可用于未来相关研究。

建立可逆性胆汁淤积大鼠模型

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

胆汁淤积是外科医生和胃肠病学家经常遇到的一种临床病症。胆汁淤积可引起多种生理变化，并影响营养状况和手术预后。研究肝脏及其他器官发生的病理生理变化具有重要意义。已有大量研究在胆汁淤积大鼠模型中开展。
在最近一项关于甲基泼尼松龙在缺血再灌注损伤中作用的研究中，我们采用了一种可逆性胆汁淤积大鼠模型。已有多种建立可逆性胆汁淤积模型的技术被报道。由于大鼠体型较小且肝胰胆系统解剖结构特殊，建立可逆性胆汁淤积大鼠模型具有较大挑战性。本视频文章演示了可逆性胆汁淤积模型的建立过程。
该模型可用于多种研究，例如观察胃肠道在营养、生理、病理、组织学和免疫学方面的变化。该模型还可用于评估胆汁淤积及各种治疗干预对主要肝脏手术的影响。

胆汁淤积是一种外科医生和胃肠病学家经常遇到的临床状况。鉴于大鼠体型较小且肝胰胆解剖结构独特，建立可逆性胆汁淤积大鼠模型具有较大挑战性。本视频文章演示了可逆性胆汁淤积模型的建立方法。

胆汁淤积是外科医生和胃肠病学家经常遇到的一种临床状况。胆汁淤积可导致多种生理变化以及……

建立可逆性胆汁淤积大鼠模型。大家好，我是来自密歇根州南菲尔德普罗维登斯医院及医疗中心的普通外科住院医师Goulash。今天我将演示建立一种可逆性胆汁淤积大鼠模型的方法。大鼠首先在麻醉诱导舱内使用异氟烷进行麻醉，随后通过面罩维持麻醉。在手术过程中，使用一根外径为0.9毫米、内径为0.6毫米的聚酯管，将其一端烧结封闭。所用器械包括标准大鼠手术包、显微外科器械、眼科镊子、棉签和8-0尼龙缝线。手术操作在手术显微镜下进行。也可使用手术放大镜进行。此处正在应用稳定的手术巾。本操作需在完全无菌条件下进行。从剑突开始，作一条长两厘米的正中切口。使用剪刀切开皮下组织和筋膜。在此切开腹膜，暴露肝脏。使用手持电凝器确保止血。此为大鼠胆道解剖结构中的中叶和左叶。此为大鼠胆道解剖结构的示意图。大鼠肝脏分为右中叶、左叶和尾状叶。这是胃，这是胆管。此处可见，胆管的大部分区域并未与门静脉和肝动脉伴行。正是利用这一段胆管进行钩挂并建立胆汁淤积模型。使用小型拉钩牵开肝叶，并用棉签将胆管向下牵拉。然后使用显微外科器械在靠近肝门处钩住胆管。这是钩挂胆管的相同步骤，在另一种大鼠模型中进行演示。同样地，此步骤是从手术显微镜外部拍摄记录的。在胆汁淤积模型构建过程中，将一根聚丙烯单股缝线穿过胆管下方，并对胆管施加牵引。这是受到牵拉的胆管。这是放大后的视野。此处正在将胆管切开。然后将聚乙烯管的尖端插入该胆管中。我们使用管饲用显微外科器械来协助完成此操作。需注意轻柔推进导管，避免用力过猛。随后在近端胆管处开窗，将8-0尼龙缝线穿过此窗口，再使用三个方结结扎ATO缝线，以固定导管位置。在第一根缝线近端的腹膜下创建第二个窗口。使用另一根ATO缝线将近端固定。然后在胆管的远端部分开窗，并将ATO缝线穿过该窗口。首先使用此缝线结扎胆管。然后将缝线缠绕在导管周围，并在导管上打结，从而牢固固定导管。此处将缝线剪断。随后，牵拉缝线被拉出。此处我们再次拉远视野。然后将导管推回腹腔，并使其自然舒适地放置。接着用 2 ml 生理盐水冲洗腹腔。然后使用 4 层纱布将液体吸干。最后检查确认导管位置合适、患者舒适，并观察腹部切口是否止血。腹膜筋膜使用 5-0 聚乳酸连续缝合关闭。随后使用间断皮内缝线关闭皮肤。通过将聚酯立方体植入胆汁淤积模型中来逆转胆汁淤积，在相同条件下于大鼠体内演示胆汁淤积的逆转。此处正在使用剪刀切开皮肤和筋膜。将肝脏牵开，牵拉直肠。使用棉签在直肠内确定一个合适的位置，以便聚酯导管能够舒适地放置。随后，我们在预先选定的导管置入位置周围，使用8-0或尼龙线放置荷包缝线。我们确保在每一针缝合时都包含腹直肌鞘的筋膜组织。随后将NEP聚乙烯管从腹膜腔中抽出。当导管留置时间较长时，导管周围可能会有明显的粘连或组织包绕，需仔细轻柔地分离松解。然后用剪刀在棉签上方剪断导管，以吸收胆汁引流液。当导管留置时间较长时，可见有大量胆汁流出。剪开导管后，再用剪刀沿脉冲缝线的中心将硬膜切开，确保硬膜全层已被完全切开。然后将导管插入鼻腔，并确保其位置舒适且方向正确。接着使用三个方结收紧固定缝线，以将导管固定在十二指肠乳头部位。随后冲洗伤口，清除术中可能渗漏的胆汁，最后关闭腹壁切口，确保导管位置舒适且止血良好后再行缝合。此处展示胆道引流，仅为演示目的，我们正将导管从Jordan处拔出，以证明胆汁可从导管自由流出。该模型的应用：此模型可用于研究胆汁淤积相关的胆道系统及胃肠道的生理、病理和组织学变化。该模型可用于研究胆汁淤积对肝手术的影响，也可用于研究胆汁淤积相关营养状态的变化。

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可逆的胆汁淤积大鼠模型的建立

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本文介绍了一种详细的实验方案，用于测量大鼠门静脉压力、内脏血流和全身血流动力学参数，以表征门静脉高压综合征。...

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本研究建立的急性肝衰竭动物模型为潜在疗法的研究提供了一种可行的替代方案。该模型结合了物理性和药物诱导性肝损伤的双重效应，为研究新型疗法的潜力提供了合适的时间窗口。...

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通过经口胃管暴露于四氯化碳（CCl4）在大鼠中诱导急性肝损伤

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我们建立了一种小鼠慢性肝纤维化模型，该模型为胆道闭锁（BA）相关的病毒诱导肝纤维化机制研究提供了合适的动物模型，同时也为未来BA的治疗提供了一个研究平台。...

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