Name: 电解下腔静脉静脉血栓形成的模型（EIM） (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: 学习使用电解下腔静脉模型在小鼠体内诱导静脉血栓形成的方法。该模型通过施加电流损伤血管内皮，在持续血流条件下形成血栓，适用于研究不同品系小鼠的血栓特征及溶栓机制。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

由美国国立卫生研究院（NIH）1P01HL089407-01A1（Lawrence，项目负责人）、动物核心A及NIH 1K01HL080962-01A2（Myers，项目负责人）资助。

1. 小鼠麻醉操作
<ol>
 <li>将动物从笼中取出，放入麻醉前诱导室，以 0.5 升/分钟的流速（通过蒸发器控制）吸入 2% 异氟烷和 100% 氧气进行气体麻醉诱导。</li>
 <li>小鼠在麻醉诱导室中镇静后，从室内取出，使用电推剪剃除腹侧腹部毛发；若使用脱毛剂，则小鼠保留在诱导室内（1 分钟）。</li>
 <li>在持续镇静状态下，称重小鼠，用无菌眼膏润滑眼睛，然后将其仰卧位置于循环温水加热装置上，在通过鼻罩给予异氟烷和氧气的全身麻醉下进行操作。此时，氧气流速降至 0.2 升/分钟。</li>
 <li>用氯己定溶液喷洒腹部（二乙酸氯己定具有快速杀菌和持久作用），并用无菌纱布擦拭三次，直至手术区域清洁。</li>
</ol>
2. 小鼠显微外科及术后恢复操作
<ol>
 <li>使用虹膜剪在皮肤和腹壁上做一条2 cm的腹正中切口，暴露腹腔。用无菌生理盐水浸湿的2×2纱布将肠管推向动物左侧。放置小鼠固定器，以便观察下腔静脉（IVC）。</li>
 <li>此时将异氟烷浓度降低至维持水平（2%），氧气流速保持在0.2升/分钟，直至手术结束。</li>
 <li>使用无菌棉签和超精细虹膜半弯组织镊进行钝性分离。操作小鼠组织时需格外小心，因其极为脆弱。</li>
 <li>从肾静脉至髂总分叉之间的所有下腔静脉侧支均用7-0非反应性聚丙烯缝线结扎，而后侧支保持开放。</li>
 <li>在电解诱导下腔静脉血栓模型（EIM）中，将连接至镀银铜线（KY-30-1-GRN, Electrospec, Dover, NJ）的25G不锈钢针插入暴露的尾端下腔静脉（见图1），并紧贴前壁放置（作为阳极）。</li>
 <li>另一根导线皮下植入，以完成电路（作为阴极）。</li>
 <li>使用Grass S48方波刺激器和恒流单元（Grass Technologies, An Astro-Med, Inc., West Warwick, RI）施加250 μA电流，持续15分钟。直流电流导致电解产物生成，这些毒性产物腐蚀下腔静脉内皮表面，促进血栓形成环境，进而引发血栓形成。</li>
 <li>15分钟后取出针头，并用棉签轻压穿刺部位以防止出血。</li>
 <li>在假手术组动物中，将针插入下腔静脉后立即拔出，不施加电流。</li>
 <li>腹壁切口采用两层缝合法关闭。本实验室使用5-0薇乔线（合成缝线）连续缝合关闭腹壁，皮肤则使用医用粘合剂闭合，无需留置体表缝线，术后无需拆线。</li>
 <li>术后小鼠置于独立笼具中恢复，在加热灯下密切观察45分钟至2小时（加热灯与笼具最小距离为24英寸），随后返回原饲养单元。若不影响研究目的，可使用镇痛药和抗炎药物。如需不给予镇痛药物，须提供科学依据，并获得兽医及IACUC批准。本实验室发现，皮下注射布托啡诺（Buprenorphine）0.05–0.1 mg/kg是小鼠术前和术后优良的镇痛方案。此外，当全身性镇痛可能干扰实验结果时，可在切口部位注射利多卡因（4 mg/kg，即1%溶液0.4 ml/kg）进行局部镇痛。</li>
 <li>我们通常未观察到因深静脉血栓（DVT）导致的术后不良反应。然而，可能的术后并发症包括麻醉意外死亡、术中失血以及因神经损伤导致的部分轻瘫。恢复缓慢的动物可给予营养凝胶或将湿润饲料置于笼底以促进恢复。出现严重术后并发症的动物应实施人道安乐死。</li>
 <li>在预定时间点，依据美国兽医协会（AVMA）《啮齿类动物安乐死指南》推荐的方法实施人道安乐死。</li>
</ol>
3. 典型结果
EIM 是一种在持续血流条件下形成血栓的模型。下图展示了在此新型模型中研究的各项参数。
 <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig1.jpg" alt="显示下腔静脉、主动脉及导丝插入进行血管通路的血管内操作示意图" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 1"> 
 图 1 展示了插入连接银镀铜线的25G不锈钢针（KY-30-1-GRN，Electrospec，美国新泽西州多佛）的解剖区域。请注意，几乎总存在一个淋巴结，可作为定位尾侧下腔静脉的解剖标志。
 <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig2.jpg" alt="血栓重量比较，EIM，柱状图，PAI-1，WT，^CT，统计分析，p值。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Figure 2"> 
 图 2：不同品系小鼠在EIM后2天的血栓重量。如预期所示，PAI-1基因敲除（KO）小鼠的血栓重量较低，而高凝状态的Delta CT小鼠（^CT）血栓重量较大。
 <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig3.jpg" alt="运动后两天不同实验组可溶性P-选择素水平的柱状图。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图3"> 
 图3：可溶性P-选择素是深静脉血栓形成的标志物，在不同小鼠品系中进行了检测。其中，PAI-1基因敲除小鼠的水平最低，而高凝状态的delta CT小鼠的水平最高。
 <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig4.jpg" alt="显示P-选择素与血栓重量相关性的图表；EIM后蛋白质水平的数据分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图4"> 
 图4 在不同品系中均发现血栓重量与可溶性P-选择素之间存在相关性。值得注意的是，在形成较小血栓的组别中，检测到的可溶性P-选择素水平最低（PAI-1基因敲除小鼠）。而在形成最大血栓的组别中，检测到的可溶性P-选择素水平最高（高凝状态delta CT小鼠）。
 <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig5.jpg" alt="超声成像，静脉血流方向，血栓检测，医学分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 5"> 
 图 5：为了证实血流的存在，在接受电诱导损伤（EIM）的小鼠中进行了超声成像。图 5 显示了小鼠在 EIM 后第 2 天的超声检查结果，随后采集了标本。请注意，血栓的形态提示其在血流存在的情况下形成

<ol><li>Diaz, J. A., Hawley, A. E., Alvarado, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombogenesis+with+continuous+blood+flow+in+the+inferior+vena+cava.+A+novel+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model.</a> Thromb Haemost. 104, 366-375 (2010).</li>
<li>Eitzman, D. T., Westrick, R. J., Nabel, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasminogen+activator+inhibitor-1+and+vitronectin+promote+vascular+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Plasminogen activator inhibitor-1 and vitronectin promote vascular thrombosis in mice.</a> Blood. 95, 577-580 (2000).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Barker, J. H., Stikovac, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+human+IgG+antiphospholipid+antibodies+on+an+in+vivo+thrombosis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Effect of human IgG antiphospholipid antibodies on an in vivo thrombosis model in mice.</a> Thromb Haemost. 71, 670-674 (1994).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+thrombosis+in+a+mouse+model+by+IgG%2C+IgM+and+IgA+immunoglobulins+from+patients+with+the+antiphospholipid+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome.</a> Thromb Haemost. 74, 1361-1367 (1995).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

小鼠是进行体内实验的优良研究工具，因此有必要建立能够紧密模拟疾病或病理状态的小鼠模型。目前已采用多种静脉血栓小鼠模型来研究深静脉血栓（DVT），包括：光化学法（2）、血流停滞法（3-4）和机械损伤法（5-6）。然而，这些模型均未在持续血流存在的情况下，利用血管内皮刺激来诱导血栓形成。EIM模型通过在下腔静脉（IVC）内施加电解刺激，在血流持续存在的条件下通过内皮细胞活化促进静脉血栓形成（1）。该模型技术操作简便，可重复性高，且具有高达99%的存活率。尽管使用电流引发电解反应，但并不会产生热量（1）。EIM模型能够较好地模拟临床DVT，因此是研究血栓形成与溶解内在机制的有力工具，同时也适用于推动抗血栓新疗法的发展。

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>英维特罗根</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr></tbody></table>

静脉血栓形成的电解下腔静脉模型（eim）

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

动物模型在深静脉血栓（DVT）研究中发挥着至关重要的作用，可用于研究血栓形成、血栓溶解以及测试潜在的治疗化合物（1）。目前，正在开发用于DVT治疗和预防的新化合物。将潜在的治疗性拮抗化合物递送至受累的血栓静脉一直存在困难。在治疗应用背景下，一种利用部分血流停滞并能在主要静脉内稳定生成血栓的模型 recently established。电解性下腔静脉模型（EIM）是一种允许在持续血流存在条件下形成血栓的DVT小鼠模型。该模型使治疗剂能够以动态方式与血栓接触，且比其他DVT模型更为敏感（1）。此外，该血栓形成模型 closely simulates 临床血栓形成的实际情况，是研究静脉内皮细胞活化、白细胞迁移、静脉血栓形成机制以及测试治疗应用的理想选择（1）。EIM模型技术操作简单，易于重复，可产生大小一致的血栓，并能获得较大的样本量（即血栓和静脉壁），满足分析需求。

通过电解诱导下腔静脉内表面内皮细胞活化，可导致静脉型血栓形成，其机制涉及内皮细胞活化和部分血流淤滞，这两者均为维尔肖三联征的组成部分。

静脉血栓形成的电解下腔静脉模型（EIM）

动物模型在深静脉血栓（DVT）研究中发挥着至关重要的作用，可用于研究血栓形成、血栓溶解过程，以及检验潜在的……

本实验的总体目标是利用电解法下腔静脉（Vanna CVA）模型在小鼠体内诱导静脉血栓形成。首先打开腹腔以暴露下腔静脉（Vanna CVA）或 IVC，随后结扎 IVC 的侧支血管。然后插入阳极和阴极，并施加电流以诱导血栓形成。最后，关闭手术切口并让动物恢复。最终可获得结果，显示在血流存在的情况下，小鼠下腔静脉内形成了静脉血栓，且不同品系小鼠中果胶水平与血栓大小之间存在相关性。Lucchesi 博士于1980年发表了该技术的概念，并在动脉系统中成功应用。当我加入密歇根大学的实验室时，我的任务是修改这一原始技术，使其可用于静脉系统。在此过程中，我考虑到血流方向，认为应将针头插入下腔静脉（IVC）起始处附近。为了在小鼠体内诱导深静脉血栓形成，首先将动物置于预手术麻醉室中，使用5%异氟烷和100%氧气进行麻醉，气体流速为每分钟0.5升。待小鼠进入镇静状态后，将其从麻醉室中取出，使用电动剪刀剃除腹部腹侧的毛发，随后称量小鼠体重。然后涂抹眼膏，并在异氟烷和100%氧气全身麻醉下，将其仰卧于循环温水加热垫上。为消毒切口区域，用氯己定溶液喷洒腹部，并用无菌纱布擦拭。重复三次，直至手术部位清洁。开始手术时，使用虹膜剪在皮肤和腹壁上做一个两厘米长的腹侧正中切口，暴露腹腔。用一块浸有无菌生理盐水的2英寸×2英寸纱布将肠管推向动物左侧。然后固定小鼠固定器，以暴露下腔静脉（IVC）。从此处开始，使用2%异氟烷和每分钟0.2升氧气的维持浓度。使用无菌涂药器棉签和超细弯头虹膜组织镊，钝性分离下腔静脉（IVC）两侧的筋膜，以充分暴露下腔静脉及其分支。注意附近有一个淋巴结，可作为解剖标志，借助7-0非反应性聚丙交酯缝线定位下腔静脉。结扎从肾静脉至髂总分叉处的所有下腔静脉侧支，后方分支保持开放。接着，将连接有镀银铜丝的25号不锈钢针插入暴露的下腔静脉段，并将其置于前壁处。这是阳极。然后将另一根带导线的针头皮下植入，以完成电路。这是阴极。使用草 S 48 方波刺激器和恒流装置，在 15 分钟内施加 250 微安的电流。这将侵蚀下腔静脉（IVC）的内皮表面，形成血栓作为对照。动物操作：将针插入下腔静脉持续 15 分钟，不施加电流。通常在操作过程中可观察到轻微变化，例如针尖附近出现少量黑点，以确认操作成功。15分钟后，通过将针头向背侧降低，并在针头穿刺点上方使用棉签，使血液重新充盈下腔静脉（IVC）针头周围的管腔，然后拔出针头。拔针时向下按压静脉。用棉签轻轻按压，直至出血停止。关闭腹腔切口时，使用5-0薇乔合成缝线以连续缝合方式关闭腹壁。然后涂抹医用粘合胶关闭皮肤。将小鼠置于加热灯下的独立笼具中恢复，并密切观察，待其恢复后再放回原有饲养单元。EIM 是一种在持续血流条件下形成血栓的模型。下图展示了在此新型模型中研究的各项参数。如预期所示，在 EIM 术后两天，小鼠品系的血栓重量（作为血栓大小的测量指标）已呈现出来。PA I-1基因敲除小鼠的血栓重量较低，已知这些小鼠纤溶活性增强，继而形成较小的血栓；而使用ELA可溶性果胶的高凝状态delta CT小鼠血栓重量较高。在不同品系小鼠中检测了深静脉血栓形成的标志物。其中PI-1基因敲除小鼠的水平最低，而高凝状态delta CT小鼠的水平最高。该图显示了在生成较小血栓的 PI 一型敲除小鼠中，不同小鼠品系的血栓重量与可溶性果胶之间的相关性。所检测到的可溶性果胶含量最低；而 delta CT 小鼠生成的血栓最大，其可溶性果胶的检测水平最高。为了证实血流的存在，对接受 EIM 处理的小鼠进行了超声检查。该图显示了小鼠在 EIM 后两天的超声结果。请注意，血栓的形状提示其是在有血流的情况下形成的。在该操作过程中，始终密切关注我们的患者至关重要。低体温是术后期间最严重影响动物生命及其研究结果的关键因素。

electrolytic-inferior-vena-cava-model-eim-of-venous-thrombosis

Research

科研

JoVE Journal

Medicine

医学

电解下腔静脉静脉血栓形成的模型（EIM）

小鼠下腔静脉完全阻断型血栓形成模型可产生可量化的静脉壁组织和血栓。该模型已证实可用于评估静脉壁与阻塞性血栓之间的相互作用，以及急性向慢性炎症转变的过程。...

小鼠下腔静脉血栓完全淤滞模型

本文描述了下腔静脉狭窄作为深静脉血栓形成的小鼠模型。该模型可重现血流受限这一人类静脉血栓形成的主要诱因之一。...

下腔静脉狭窄：一种深静脉血栓的小鼠模型

本实验方案描述了利用血流停滞模型诱导静脉血栓形成的操作步骤。此外，我们采用一种非侵入性方法，用于随时间测量血栓的形成与溶解过程。...

通过高频超声监测的小鼠血流淤滞诱导的深静脉血栓形成

精确的心腔内超声心动图（ICE）在评估左心房结构方面表现出显著的准确性，是一种具有前景的心脏结构评估方法。本文提出了一种利用心腔内超声心动图结合快速解剖建模（FAM）导管重建技术进行左心房及肺静脉三维建模的实验方案。...

采用精确的心内超声心动图方法对左心房和肺静脉进行三维建模

本文旨在介绍一种利用血管夹进行静脉结扎以评估小鼠癌症模型中静脉血栓形成的方法，并对该方法进行了优化。优化后的方案可减少血栓相关测量指标的变异性，并提高其在人类癌症相关静脉血栓研究中的适用性。...

癌症小鼠模型中的静脉血栓形成检测

本方案介绍了一种用于在非血栓性、血栓性和血栓后深静脉中测试静脉成形术球囊（VB）干预的存活啮齿动物模型。...

啮齿类动物下腔静脉球囊血管成形术模型

本研究介绍了一种利用氯化铁诱导大鼠上矢状窦血栓形成的可重复、微创动物模型的建立方案，该方法结合丝线结扎技术，并采用激光散斑血流成像和高分辨率超声进行评估。...

改良氯化铁诱导上矢状窦血栓形成模型的建立

本文介绍了一种优化的显微外科技术，用于构建模拟人类脑动脉分叉部动脉瘤的动脉分叉部动脉瘤模型。将静脉囊缝合至两侧颈总动脉人工创建的真实分叉处。借助改进的显微外科操作技术，以及积极的术后抗凝和镇痛措施，可显著降低动物手术并发症发生率，并实现较高的动脉瘤通畅率。...

兔模型中静脉 pouch 动脉分叉动脉瘤的显微外科技术：技术要点

为了增进对细胞和分子水平新生组织形成机制的理解，近期开发了一种小鼠组织工程血管（TEVG）模型。该移植物被植入C57BL/6小鼠的肾下腔静脉作为置换移植物。此模型所获得的结果与临床研究中的结果相似，但所需时间显著缩短。...

小鼠模型中下腔静脉移植旁路移植物的植入

癌症是一种复杂的疾病，其发展受到肿瘤周围组织以及局部促炎和抗炎介质的影响。因此，与皮下注射模型相比，原位注射模型可能更适用于研究癌症进展，以更好地模拟人类疾病的病理过程。...

将乳腺癌细胞正位注射至小鼠乳腺脂肪垫以研究肿瘤生长

学习使用电解下腔静脉模型在小鼠体内诱导静脉血栓形成的方法。该模型通过施加电流损伤血管内皮，在持续血流条件下形成血栓，适用于研究不同品系小鼠的血栓特征及溶栓机制。

静脉血栓形成的电解下腔静脉模型（EIM）

探索更多视频