大脑中动脉闭塞的小鼠模型
February 13th, 2011
在视频中，我们证明了生产中使用腔内单丝的成年小鼠的大脑中动脉闭塞的方法。我们还展示了如何评价脑梗死的严重程度，由2,3,5 - 三苯基氯化四氮唑（TTC）染色。
嗨，我叫 Terrence Jam。我叫 Hai Joe。今天，我们将向您展示如何进行中动脉闭塞的小鼠模型。
那么让我们开始吧。该实验从缝合的准备开始。首先将缝合线切成 20 毫米的小块。
接下来，通过将缝合线朝向烧灼器来圆润尖端。然后，测量缝合线的尖端。现在我们准备将面罩放在其背面开始手术。
沿中线切开。使用镊子暴露 ECA。沿 ECA 的颈外动脉有许多分支。
其中一个分支是 STA，即甲状腺上动脉。STA 需要用双极钳凝固。然后需要剪切 STA，以便更好地隔离 ECA。
接下来，将 ECA 凝固，并使其大小尽可能远离 CCA。此时，您可能希望隔离 ECA 以获得更好的访问。然后将两根缝合线松散地系在 ECAA 周围，相距几毫米。
在 CCA 的分支处将夹子应用于 ECA 和 ICA。然后继续夹住 ECA 树桩的尖端。接下来，重新定位 ECA 以与 ICA 对齐。
这允许缝合线从 ECA 连续进入 ICA。插入前测量缝合线的总长度。将缝合线插入通过夹住 ECA 残端制成的开口中。
当缝合线穿过远端结时，通过收紧结来固定结。接下来，取下夹子并将缝合线进一步插入 ECA。当缝合线穿过近端结时，通过收紧结来固定结。
固定两个结后，小心地沿动脉插入缝合线，直到穿过 9 到 10 毫米的缝合线。分叉点，这可以通过从缝合总长度中减去到分叉点的缝合长度来完成。当缝合线到达 MCA 的起点时。
MCA 被遮挡。24 小时后，群众牺牲，大脑被隔离。对于 TTC 染色，将分离的大脑放入模具中并用剃须刀片切片。
然后将大脑在室温下置于 2% TTC 中 20 分钟。最后，大脑是固定的、一夜之间和中性的。缓冲福尔金。
缝合准备是一个微妙的过程。以下是一些有用的提示。像这样放置缝合线和烧灼器。
然后在保持烧灼器静止的同时，慢慢靠近缝合线。接下来，测量缝合线以确保其尺寸合适。我们在这个实验中使用的缝合线尺寸约为 0.21 到 0.22 毫米。
手术开始时，将面罩放在其背面，并用 30% 氧气和 70% 氮气诱导麻醉。沿中线切开一个切口，然后使用牵开器打开通往该区域的通道。它应该看起来像这样。
用镊子小心地分开组织。然后用镊子暴露和分离 ECA，在分离 ECA 的过程中，需要对 STA 进行凝固和切割。这允许隔离较长的 ECA。
接下来，需要借助双极钳对 ECA 进行凝固凝固后，需要切割 ECA。接下来，隔离 ECA 并将两条缝合线松散地系在 ECAA 周围，相距几毫米。结果应如下所示。
现在在 CCA 的分叉处将夹具应用于 ICA 和 ECA。确保 Clam 完全阻碍了流向 ECA 的血液。然后夹住 ECA 树桩的末端。
在 ECA 上开口后插入之前测量缝合线。插入缝合线和开口，越过远端 Knot。缝合线穿过远端结后，收紧结。
接下来，取下夹子。验证远端结牢固后，沿 ECA 进一步插入缝合线，越过近端结。接下来，收紧近端结。
现在小心地将缝合线沿 ECA 插入 ICA。继续沿 ICA 插入缝合线，直到缝合线超过分叉点 9 到 10 毫米。这可以通过从缝合总长度中减去直到分叉点的缝合长度来完成。
接下来，修剪缝合线，使其不会伤害周围组织。然后缝合切口，让 Mouse 恢复。手术后 24 小时准备 TTC 染色。
首先牺牲颈椎脱位的小鼠。然后将大脑与颅骨分离并放入模具中。然后用剃须刀片切片，在室温下用 2% TTC 染色大脑 20 分钟。
然后固定过夜，并缓冲 10% 中性用于 melin。就是这样。感谢您的观看，祝您的实验好运。
概述
本视频展示了一种使用管腔单丝导线在成年小鼠中产生中脑动脉闭塞（MCAO）的方法。它还说明了如何通过2,3,5-三苯基四唑氯化物（TTC）染色评估脑梗塞的程度。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 实验手术
- 中风模型
背景
- 中脑动脉闭塞是研究中风的常用模型。
- TTC染色是一种用于评估脑梗塞的方法。
- 理解MCAO技术对神经科学研究至关重要。
- 该方法允许评估中风的治疗干预措施。
研究目的
- 展示在小鼠中进行MCAO的手术技术。
- 提供评估脑梗塞的协议。
- 提高中风研究的可重复性。
所用方法
- 准备用于闭塞的缝线。
- 手术中分离外颈动脉（ECA）。
- 插入缝线以闭塞中脑动脉（MCA）。
- 手术后使用TTC染色评估梗塞。
主要结果
- 该技术成功地在成年小鼠中闭塞了MCA。
- TTC染色有效地突出了脑梗塞区域。
- 该协议可以用于进一步的中风研究。
- 详细的步骤确保了进行该程序的研究人员的清晰度。
结论
- MCAO模型是中风研究的宝贵工具。
- 适当的技术和评估方法对准确结果至关重要。
- 该视频作为研究人员的全面指南。
常见问题
Executive Industry Relevance
The mouse model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) provides a robust, reproducible platform for evaluating ischemic stroke mechanisms and potential therapeutic interventions in preclinical research. This model enables quantitative assessment of infarct size and supports translational continuity from early discovery through preclinical validation. Its widespread adoption in neuroscience R&D reflects its value for mechanistic de-risking and predictive confidence in cerebrovascular target validation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of cerebrovascular injury pathways relevant to ischemic stroke.
- Supports functional validation of neuroprotective targets in a disease-relevant system.
- Facilitates mechanistic de-risking by modeling both permanent and transient ischemic events.
- Provides quantitative endpoints for hypothesis-driven target triage.
Screening & Assay Development
- Establishes a validated in vivo system for evaluating candidate compounds' efficacy in reducing infarct size.
- Standardizes assessment through TTC staining, enabling reproducible and quantitative readouts.
- Prepares a scalable workflow for screening neuroprotective agents in a controlled ischemic context.
- Enables reliable comparison of intervention effects across experimental cohorts.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with human stroke pathology by targeting the MCA territory, enhancing translational relevance.
- Supports biomarker discovery and validation through quantifiable infarct measurements.
- Facilitates risk-adjusted advancement of neuroprotective strategies into later-stage studies.
- Provides continuity from mechanistic discovery to preclinical efficacy evaluation.
Pipeline & Workflow Integration
This MCAO model bridges early discovery, lead identification, and preclinical validation for cerebrovascular targets and interventions.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and pathway clarification in ischemic stroke models.
- Screening: Delivers reproducible, quantitative infarct size measurements for compound evaluation.
- Analytics: Provides standardized TTC staining outputs for cross-condition statistical analysis.
- Translational Research: Maintains disease relevance and supports biomarker alignment for preclinical studies.
- Enterprise Reuse: Functions as a reusable platform for diverse neurovascular research and therapeutic screening.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in stroke research.
- Operational Value: Promotes standardization, reproducibility, and scalability in preclinical workflows.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions and enhances capital efficiency by providing robust efficacy data.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of neuroprotective candidates.
Implementation Considerations
- Requires surgical expertise in vascular occlusion and animal handling.
- Needs access to precise instrumentation for suture preparation and brain slicing.
- Demands cross-team standardization of TTC staining and infarct quantification protocols.
- Adaptable to both permanent and transient occlusion models for broader research utility.
- Potential limitations include variability in infarct size and technical complexity of the procedure.
