Name: 一种无创性的发采样技术，以获得难以捉摸的小型兽类高质量的DNA (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-13T09:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: 了解一种无创性毛发采样技术，用于从难以捉摸的美洲鼠兔获取高质量DNA。该方法利用胶带陷阱收集毛发样本，支持野生动物生态学与保护遗传学研究，同时最大限度减少对动物的干扰。

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我们感谢 L. Evans、B. Granger、D. Rissling、Z. Sim、A. Goodwin、K. Hayhurst 和 D. Kuch 在野外工作中的协助。K. Galbreath 慷慨提供了来自贝拉库拉山谷的鼠兔肝脏样本。感谢 A. Gonçalves da Silva 和 K. Larsen 富有启发性的讨论，这些讨论有助于本项非侵入性遗传取样方法的设计。本研究由加拿大自然科学与工程研究理事会发现基金以及 MAR 获得的英属哥伦比亚大学奥肯那根分校个人研究基金资助。PH 得到了瑞士国家科学基金会博士后奖学金（PBSKP3_128523）的支持。本研究遵循英属哥伦比亚大学的动物护理方案（证书编号：A07-0126）开展。

1. 毛发捕获法
在设置套索之前，必须在鼠兔栖息地或碎石坡中确定一个理想的位置。该位置包括干草堆（即动物在夏末收集的植物贮藏堆）以及在排泄点发现的新鲜粪便。将长度为10–50 cm的胶带条卷起，形成360°的粘性表面，并以网状方式布置，包裹住鼠兔干草堆（图1）或排泄点的入口。根据岩石的结构，可使用一段鱼线来支撑毛发套索的结构；但当入口较小时（直径<30 cm），通常无需使用鱼线。有关鱼线使用的完整描述，参见Henry和Russello（2010）3。应尽可能频繁地检查毛发套索，并收集粘在胶带上的毛发样本（图2），然后进行标记。样本运回实验室后，使用无菌镊子将毛发从粘性胶带上取下，转移至冻存管中，并在-20°C下保存，直至进一步处理。沿同一毛发套索上聚集在一起的毛发样本被视为来自同一个体，而彼此独立聚集的样本则被认为来自不同个体。在后一种情况下，应将毛发分别放入不同的管中。这些假设后续可通过微卫星基因型数据进行DNA指纹分析和个体同一性概率计算加以验证。
2. DNA 提取
由于鼠兔的毛发非常细，且毛根球极小，我们此前已证明，为获得足量的高质量DNA以进行后续PCR扩增，至少需要25根毛发3。我们采用DNA IQ系统（Promega，Madison，WI，USA），并根据制造商提供的说明书稍作修改，用于从毛发样本中提取DNA。首先，将毛发样本在微量离心机中离心，以避免打开管盖时毛发丢失。然后，通过将80 μl孵育液与10 μl DTT（1 M）和10 μl蛋白酶K（18 ng/ml）混合，配制孵育溶液，使DTT终浓度为0.1 M，蛋白酶K终浓度为1.8 ng/ml。向样本中加入100 μl孵育液，在56°C孵育1小时。在此期间，通过向每100 μl裂解缓冲液中加入1 μl DTT（1 M），配制裂解液，使DTT终浓度为0.01 M。向样本中加入200 μl配制好的裂解液，再加入7 μl DNA IQ树脂，高速涡旋振荡3秒，并在室温下孵育5分钟。随后将样本涡旋振荡2秒，放入磁力架中，使磁珠与溶液分离。小心吸除并弃去上清液，注意不要扰动磁性树脂沉淀。接着向样本中加入100 μl配制好的裂解液，涡旋振荡后再次放入磁力架中进行分离。吸除并弃去裂解缓冲液，随后使用洗涤缓冲液（100 μl）重复此步骤三次。之后将样本在磁力架中静置干燥15分钟。干燥后，向样本中加入100 μl洗脱缓冲液，在65 °C孵育5分钟。涡旋振荡样本后放入磁力架中，将含有洗脱DNA的溶液转移至1.5 ml Eppendorf管中，于-20°C保存，直至后续操作。肝脏样本的DNA也使用DNA IQ系统提取，并作为PCR扩增的阳性对照。
3. PCR 扩增
利用非侵入性毛发捕获法和肝脏样本提取的DNA，随后用于扩增一组常用的分子标记（微卫星标记、AFLP、线粒体细胞色素b基因以及ZFX/ZFY性别鉴定标记）。PCR反应在25 μL体系中进行，使用Veriti热循环仪（Applied Biosystems，美国加利福尼亚州福斯特城），反应体系包含：10–20 ng DNA、每种引物0.5 μM、10 mM Tris-HCl（pH 8.3）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200 μM dNTPs、10 μL牛血清白蛋白（BSA；New England Biolabs，美国马萨诸塞州伊普斯威奇）以及0.5 U AmpliTaq Gold DNA聚合酶（Applied Biosystems）。微卫星位点的扩增程序采用降落式PCR（touchdown PCR）进行优化：95°C预变性10分钟，随后进行35个循环（95°C变性30秒，退火30秒，72°C延伸45秒），最后在72°C延伸10分钟。退火温度从60°C开始，每个循环降低1°C，直至第6个循环达到55°C，之后剩余的29个循环均在55°C下进行。线粒体片段的扩增程序与上述相同，但采用35个循环，退火温度为50°C。扩增片段长度多态性（AFLP）分析按照Bonin4描述的脊椎动物基因组实验方案进行。最后，采用PCR-RFLP方法结合HinfI限制性内切酶消化对ZFX/ZFY位点进行分子性别鉴定5。微卫星、AFLP和细胞色素b基因的PCR产物在ABI 3130XL遗传分析仪（Applied Biosystems）上进行检测；而经酶切的ZFX/ZFY片段则与100 bp DNA分子量标记（New England Biolabs）一同在含2.5% SYBR Safe DNA染料（Invitrogen，美国加利福尼亚州卡尔斯巴德）的3%琼脂糖凝胶上电泳，并使用RED个人凝胶成像系统（Alpha Innotech，美国加利福尼亚州圣利安卓）进行观察。微卫星和AFLP数据使用Genemapper v3.7软件（Applied Biosystems）进行分析，线粒体DNA测序结果则使用Sequencher v4.7软件（Gene Code Corporation，美国密歇根州安娜堡）进行序列比对与可视化。
4. 代表性结果
利用非侵入性套索获取的毛发样品所提取的DNA，用于PCR扩增多种类型的分子标记。作为比较依据，同时对肝脏样品提取的DNA与毛发样品进行了扩增。毛发和肝脏样品的核微卫星位点均成功扩增（图3）。尽管使用肝脏样品时信号强度更高，但这并未对基因型判读产生不利影响（图3）。在使用AFLP（图4）、线粒体DNA序列（图5）以及ZFX/ZFY分子性别鉴定标记（图6）时，也获得了类似结果。
<img src="/files/ftp_upload/2791/2791fig1.jpg" alt="自然界中的伪装技术；岩石、植物、鱼线、封箱胶带。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 1"> 
图 1. 在干草堆处设置的无创毛发捕获装置示例。将卷起的透明封箱胶带条以网状方式排列，围住干草堆的入口。此处使用一段鱼线为毛发捕获装置提供额外支撑。
<img src="/files/ftp_upload/2791/2791fig2.jpg" alt="动物毛发鉴定，岩石上的体毛和爪毛，环境研究，野外调查。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 2"> 图 2. 一个成功的毛发捕获装置，其中粘附了大量粘在封箱胶带上的毛发。
<img src="/files/ftp_upload/2791/2791fig3.jpg" alt="核微卫星分析图；肝脏与毛发比较显示峰数据结果。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图3"> 
图3. 在Genemapper v3.7（Applied Biosystems）中显示的一个代表性核微卫星色谱图（Ocp6）8。上方色谱图是通过扩增肝组织DNA获得的，在该位点为杂合子（354/358）。下方色谱图代表另一个个体，其基于从毛发中提取的DNA在该位点表现为杂合基因型（358/362）。尽管毛发样本色谱图的信号强度低于肝组织样本，但这种信号差异并未对基因型判读造成不利影响。
<img src="/files/ftp_upload/2791/2791fig4.jpg" alt="AFLP 分析结果；肝脏与毛发 DNA 比较，电泳图谱，遗传变异研究。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 4"> 
图 4. 在 Genemapper v3.7（Applied Biosystems）中显示的一个代表性 AFLP 色谱图（E31T32）。上方的色谱图是通过扩增肝脏组织中的 DNA 获得的，下方的色谱图代表从毛发中提取的 DNA。 
<img src="/files/ftp_upload/2791/2791fig5.jpg" alt="线粒体DNA序列图谱，细胞色素B分析用于肝脏和毛发比对。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图5"> 
图5. 在Sequencher v4.7软件（Gene Code Corporation）中显示的代表性线粒体DNA序列色谱图（细胞色素B）。上方色谱图通过扩增肝组织DNA获得，下方色谱图代表从毛发中提取的DNA。
<img src="/files/ftp_upload/2791/2791fig6.jpg" alt="分子性别鉴定标记凝胶电泳结果，显示用于性别鉴定的DNA条带（ZFX/ZFY）" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图6"> 
图6. 对肝脏和毛发样本扩增的代表性分子性别鉴定标记（ZFX/ZFY）。该方法基于以下观察：Y染色体在此区域含有一个HinfI限制性酶切位点，而X染色体缺乏该位点。因此，雌性产生两条共迁移的432 bp片段，而雄性则产生432 bp、261 bp和171 bp的片段。

<ol><li>Kendall, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demography+and+Genetic+Structure+of+a+Recovering+Grizzly+Bear+Population%5BTitle%5D)+AND+%22J+Wildlife+Manage%22%5BJournal%5D)">Demography and Genetic Structure of a Recovering Grizzly Bear Population.</a> J Wildlife Manage. 73, 3-3 (2009).</li>
<li>Rudnick, J. A., Katzner, T. E., Bragin, E. A., DeWoody, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-invasive+genetic+evaluation+of+population+size%2C+natal+philopatry%2C+and+roosting+behavior+of+non-breeding+eastern+imperial+eagles+%28Aquila+heliaca%29+in+central+Asia%5BTitle%5D)+AND+%22Conserv.+Genet%22%5BJournal%5D)">A non-invasive genetic evaluation of population size, natal philopatry, and roosting behavior of non-breeding eastern imperial eagles (Aquila heliaca) in central Asia.</a> Conserv. Genet. 9, 667-667 (2008).</li>
<li>Henry, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+population+structure+and+ex+situ+representation+of+the+endangered+Amur+tiger%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ecol%22%5BJournal%5D)">In situ population structure and ex situ representation of the endangered Amur tiger.</a> Mol Ecol. 18, 3173-3173 (2009).</li>
<li>Henry, P., Russello, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obtaining+high+quality+DNA+from+elusive+small+mammals+using+low-tech+hair+snares%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Wildlife+Res%22%5BJournal%5D)">Obtaining high quality DNA from elusive small mammals using low-tech hair snares.</a> Eur J Wildlife Res. , (2010).</li>
<li>Bonin, A., Pompanon, F., Taberlet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+amplified+fragment+length+polymorphism+%28AFLP%29+markers+in+surveys+of+vertebrate+diversity.+Method+Enzymol+395%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Use of amplified fragment length polymorphism (AFLP) markers in surveys of vertebrate diversity. Method Enzymol 395.</a> , 145-145 (2005).</li>
<li>Fontanesi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexing+European+rabbits+%28Oryctolagus+cuniculus%29%2C+European+brown+hares+%28Lepus+europaeus%29+and+mountain+hares+%28Lepus+timidus%29+with+ZFX+and+ZFY+loci%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ecol+Resour%22%5BJournal%5D)">Sexing European rabbits (Oryctolagus cuniculus), European brown hares (Lepus europaeus) and mountain hares (Lepus timidus) with ZFX and ZFY loci.</a> Mol Ecol Resour. 8, 1294-1294 (2008).</li>
<li>Piggott, M. P., Taylor, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remote+collection+of+animal+DNA+and+its+applications+in+conservation+management+and+understanding+the+population+biology+of+rare+and+cryptic+species%5BTitle%5D)+AND+%22Wildl.+Res%22%5BJournal%5D)">Remote collection of animal DNA and its applications in conservation management and understanding the population biology of rare and cryptic species.</a> Wildl. Res. 30, 1-1 (2003).</li>
<li>Banks, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demographic+monitoring+of+an+entire+species+%28the+northern+hairy-nosed+wombat%2C+Lasiorhinus+krefftii%29+by+genetic+analysis+of+non-invasively+collected+material%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Conserv%22%5BJournal%5D)">Demographic monitoring of an entire species (the northern hairy-nosed wombat, Lasiorhinus krefftii) by genetic analysis of non-invasively collected material.</a> Anim. Conserv. 6, 101-101 (2003).</li>
<li>Litvaitis, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+range-wide+survey+to+determine+the+current+distribution+of+New+England+cottontails%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Soc+B%22%5BJournal%5D)">A range-wide survey to determine the current distribution of New England cottontails.</a> Wildlife Soc B. 34, 1190-1190 (2006).</li>
<li>Peacock, M. M., Kirchoff, V. S., Merideth, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+nine+polymorphic+microsatellite+loci+in+the+North+American+pika%2C+Ochotona+princeps%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ecol+Notes%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of nine polymorphic microsatellite loci in the North American pika, Ochotona princeps.</a> Mol Ecol Notes. 2, 360-360 (2002).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

非侵入性遗传取样已成为传统活体捕获方法的一种颇具吸引力的替代方案，原因如下。首先，通过从野生种群中无干扰地收集生物样本（例如粪便、毛发、羽毛、唾液和黏液），研究人员可以在不干扰、不接触甚至不直接观察动物的情况下对其进行研究，从而降低对动物和研究人员双方的风险。其次，非侵入性遗传取样使生物学家能够研究那些行踪隐秘或稀有物种的种群，而使用传统的活体捕获方法往往难以实现这一目标6。第三，非侵入性遗传取样（NGS）有可能通过减少对动物的干扰、降低取样工作量和成本，从而增加样本量，有助于减少种群参数估计中的偏差7。当涉及濒危物种时，这一点尤为重要，因为种群参数的偏差估计可能导致不恰当的管理决策。
在本视频文章中，我们以美洲鼠兔为例，介绍一种简单、新颖、经济且非侵入性的方法，用于采集难以捕捉的小型哺乳动物样本。我们证明，从毛发中提取的DNA在微卫星、AFLP、线粒体和性别鉴定标记方面的表现与从肝脏样本中提取的DNA相当，这使得这种非侵入性采样方法成为活体捕获或致死采样的一种理想替代方案。总体而言，我们预计该方法将在稀有或难以捕捉的小型哺乳动物物种的种群遗传学和行为学研究的数据采集阶段发挥重要作用，同时最大限度地减少对研究对象的影响。

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;jove_step&quot;&gt;毛发捕获器&lt;/p&gt;&lt;ul&gt;&lt;李&gt;透明封箱胶带卷（3M，美国明尼苏达州圣保罗）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;钓鱼线（10磅）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;冻存管（2 ml）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;无菌镊子&lt;/li&gt;&lt;李&gt;液氮杜瓦瓶（可选）&lt;/li&gt;&lt;/ul&gt;&lt;p class=&quot;jove_step&quot;&gt;DNA提取：&lt;/p&gt;&lt;ul&gt;&lt;李&gt;DNA IQ 系统（货号：DC6701；Promega），配合组织与毛发提取试剂盒（货号：DC6740；Promega）使用。&lt;/li&gt;&lt;李&gt;MagneSphere 技术磁力分离架（货号 # Z5342；Promega）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;微型离心机&lt;/li&gt;&lt;李&gt;杂交炉或水浴锅&lt;/li&gt;&lt;李&gt;1.5 ml 离心管&lt;/li&gt;&lt;/ul&gt;</td></tr></tbody></table>

一种用于从难以捕捉的小型哺乳动物获取高质量dna的非侵入性毛发采样技术

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

非侵入性遗传取样方法在野生动物种群研究中正变得越来越重要。已有若干研究报道采用非侵入性取样技术来调查野生种群的群体遗传学与种群统计学特征1。当研究对象为稀有或难以捕捉的物种时，该方法已被证明尤为有效2。尽管已有多种方法被开发用于从食肉动物和中型哺乳动物身上采集毛发、粪便及其他生物材料，但这些方法在难以捕捉的小型哺乳动物中的应用仍鲜有验证。在本视频中，我们介绍一种新颖、低成本且非侵入性的毛发捕获装置，专门针对一种难以捕捉的小型哺乳动物——美洲鼠兔（Ochotona princeps）。我们描述了该毛发捕获装置的总体设置，该装置由若干条胶带以网状形式排列，放置于鼠兔活动路径沿线。我们展示了该装置在收集大量毛发方面的高效性，所获样本可带回实验室进行后续分析。随后，我们演示了使用DNA IQ系统（Promega）提取DNA的过程，并展示了该方法在扩增常用分子标记方面的实用性，包括核微卫星标记、扩增片段长度多态性（AFLPs）、线粒体序列（800 bp）以及分子性别鉴定标记。总体而言，我们展示了这种新型非侵入性毛发捕获装置作为野生动物种群生物学家取样技术的有效性。我们预期该方法可广泛应用于多种小型哺乳动物，从而在自然种群中开辟新的研究领域，同时将对研究对象的影响降至最低。

我们提出了一种非侵入性取样方法，可高效地从难以捕捉的小型哺乳动物（如美洲鼠兔）身上收集毛发样本。通过从所采集的毛发中提取DNA，并扩增多种常用于野生动物生态学与保护研究的分子标记物，我们展示了该方法的有效性。

一种用于从难以捕捉的小型哺乳动物获取高质量DNA的非侵入性毛发采样技术

非侵入性遗传取样方法在野生动物种群研究中正变得愈发重要。已有若干研究报道了使用……

野生动物种群遗传学家正越来越多地采用非侵入性取样方法，以获取目标物种的数据。这类方法已被证明在研究动物行为、种群、种群统计学和遗传学等问题时十分有效，尤其适用于稀有且难以观察的动物。通过远距离收集毛发等生物样本，研究人员可以在不干扰、不伤害甚至不直接观察目标物种的情况下开展研究。尽管这些技术主要应用于中型至大型食肉动物（如灰熊），但针对小型植食性哺乳动物的研究仍相对较少，亟需填补这一空白。目前正在开发针对小型哺乳动物取样的新型创新方法。本视频文章介绍了一种新颖且创新的方法，可无干扰地从一种名为美洲鼠兔的小型兔形目动物身上获取毛发样本。这类小型哺乳动物分布于北美洲的山脉地区，从新墨西哥州和加利福尼亚州一直延伸至不列颠哥伦比亚省中部。它们栖息在被称为塔拉斜坡的岩石滑坡地带，这些地形可为它们提供躲避捕食者的庇护所，以及抵御极端环境条件的保护。在其分布范围的南部，它们通常生活在海拔超过2,500米的高处；但在分布范围最北端，也可能出现在海平面处。鼠兔不进行冬眠。夏季时它们全天都保持活跃，但主要在早晨和傍晚活动。当气温较低时，它们会进入塔里坡附近相邻的草甸，在周围的植被中觅食。PIKA 的一个特点是，它不会只在开阔地带进食。它会将食物带回塔利斯地区的领地，并储存在干草堆中。尽管该物种容易被发现，但其天性胆小，常常会避开研究人员设置的活体陷阱。此外，研究发现鼠兔对人为抓握非常敏感，这可能导致动物死亡，从而为研究一系列生态学、行为学和进化生物学问题带来挑战。在尽量减少干扰的同时研究这种难以捉摸的小型哺乳动物，不列颠哥伦比亚大学奥肯那根校区的博士生Philippe Henry开发出一种非常适合该物种的非侵入性取样技术。在布设陷阱之前，他首先在塔利斯山坡上寻找活跃的鼠兔活动区域的证据。这些证据包括干草堆，即该动物在夏末收集并储存的植物堆，用于越冬生存，以及新鲜的粪便。这通常出现在特定的大型地点。一旦在tlu内确定了潜在的栖息地高峰区域，便会在其入口处战略性地放置毛发捕获装置。Philippe使用一卷包装胶带，熟练地将胶带卷成条状，并以网状方式排列，将其包裹起来。隐蔽陷阱的入口采用精巧的设计，形成一个大小适中的孔洞，既不会过大也不会过小，以便动物能够顺利通过。理论上，鼠兔会穿过这种套索装置，在继续其日常活动的同时，留下其毛发样本，且不受干扰。毛发本身非常细，带有微小的毛囊根部。为了获得可用于分析的合格样本，需要至少 25 根来自同一人的毛发。毛发在胶带上的附着位置也必须相互分离。任何独立聚集的毛发均被视为来自不同个体。尽管聚集在一起的毛发被视为同一样本，但仍需使用无菌镊子小心地从胶带上取下收集到的毛发，避免破坏样本结构，尤其是含有最高浓度核DNA的毛囊根部。随后，将毛发小心放入一个2毫升的低温冻存管中，并置于液氮罐内保存，直至样本送抵实验室进行进一步分析。一旦进入实验室，首先将毛发样本在微量离心机中离心，以防止打开管盖时毛发丢失；随后使用Promega DNA IQ系统从毛发样本中提取DNA，第一步是配制含有100微升孵育缓冲液、1.8毫克/毫升蛋白酶K和0.1摩尔DTT的溶液。随后，向毛发中加入100微升孵育溶液，在56摄氏度下孵育1小时。然后向样品中加入200微升裂解缓冲液（含0.01摩尔DTT）和7微升重悬的DNA IQ树脂。将样品高速涡旋振荡3秒，并在室温下孵育5至10分钟。将消化后的样品在高速下涡旋震荡两秒钟，然后置于磁性分离架中。此时，含有DNA片段的磁性树脂会立即从溶液中分离出来，并在离心管底部形成沉淀。随后移除并弃去上清液。接下来，再次向样本中加入100微升裂解缓冲液，涡旋混匀后置于磁力架上进行分离。随后，使用洗涤缓冲液重复此步骤三次。最后一次洗涤完成后，将样本留在磁力架上干燥15分钟。然后向样品中加入100 µL洗脱缓冲液，在65 °C下孵育5分钟。最后，将样品涡旋振荡2秒，并置于磁力架上。随后将DNA溶液转移至1.5 mL离心管中，于-20 °C保存。在进一步分析之前，我先自我介绍一下，我叫Peter Bohi。我是不列颠哥伦比亚大学奥肯那根校区Michael Rosso博士的生态与保护基因组学实验室的一名博士候选人。今年夏天我们采集的毛发样本中提取的DNA，随后被用于PCR扩增多种类型的分子标记。我们还使用肝脏样本作为阳性对照和基础。为了比较我们的方法，我们扩增了核微卫星位点，这些位点将用于研究我们动物种群的遗传结构，以及用于研究沿海拔梯度遗传适应基础的AFLP基因组扫描。我们还扩增了长达800个碱基对的线粒体DNA序列，可用于研究该物种的系统地理学，并应用基于锌指序列和PCR-RFLP的分子性别鉴定工具，以确定我们种群中个体的性别。在所有测试的标记物中，从毛发和肝脏样本提取的DNA所产生的DNA序列和基因型质量相当。在本视频中，我们证明了这种非侵入性取样方法结合DNA IQ提取方案是有效的，能够获得足量且质量足以用于PCR扩增的毛发DNA。总体而言，我们预计该方法将有助于推动对稀有或难以捕捉的小型哺乳动物种群、遗传学及行为学研究的数据采集，同时最大限度地减少对研究物种的影响。

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