Name: 脊髓灰质炎病毒识别粒子凝集法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: 学习使用粒子凝集法快速识别脊髓灰质炎病毒。该方法利用包被嵌合分子的明胶颗粒，通过一步反应检测所有血清型，简化操作流程并显著缩短检测时间，提高病毒学诊断效率。

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我们感谢和子和田提供的出色技术协助。我们感谢野本昭教授慷慨提供了PVR-IgG2a的杆状病毒表达载体。本研究部分得到了日本厚生劳动省“脊髓灰质炎根除推进补助金”以及“新发和再发传染病研究补助金”的资助。

1. 维持培养基（MM）和生长培养基（GM）的制备
关于MM和GM的制备，请参见世界卫生组织（WHO）的脊髓灰质炎实验室手册1。可分别使用添加2%胎牛血清（FCS）和10% FCS的杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）作为MM和GM的替代物。
2. 抗PV抗体的制备
<ol>
<li>通过向每瓶抗PV抗体（1型、2型或3型）中加入水（每瓶0.5 mL）来重悬抗PV抗体（RIVM PV分型抗血清）。将重悬后的抗体溶液（每种0.5 mL）分别加入含有4.5 mL MM的已标记试管中。 注意：某些批次的抗PV抗体以已重悬形式提供（每瓶0.5 mL）。对于此类批次的抗PV抗体，无需再加水进行重悬。</li>
<li>等体积混合重悬后的抗PV抗体。对于抗PV1+2、2+3或3+1：取每种重悬抗体1.8 mL进行混合（1.8 mL + 1.8 mL = 每种混合液3.6 mL）。对于抗PV1+2+3：取每种重悬抗体1.2 mL进行混合（1.2 mL + 1.2 mL + 1.2 mL = 3.6 mL）。 注意：PV样本中可能含有不同血清型PV的混合物。为了在多种PV共存的样本中鉴定单一血清型，需使用抗PV抗体混合液（即1+2、2+3、3+1、1+2+3）。</li>
<li>向每种抗PV抗体混合液（1+2、2+3、3+1或1+2+3，每份3.6 mL）中加入其体积1/5的FCS（0.72 mL），最终FCS浓度为18.2%。 注意：添加FCS的目的是减少抗体引起的明胶颗粒非特异性凝集。</li>
<li>将抗体混合液保存于-20 °C，待PA实验时使用。</li>
</ol>
3. 致敏明胶颗粒的重建
<ol>
<li>向试剂盒中提供的一个致敏明胶颗粒小瓶（以冻干粉形式提供）加入1.5 mL试剂盒中包含的重悬缓冲液。</li>
<li>轻轻敲击混匀</li>
<li>将重悬后的致敏颗粒保存于4 °C。重悬后的明胶颗粒在4 °C下至少可保持活性2周，但建议在检测前新鲜配制。</li>
</ol>
重要提示： 
请勿混合使用不同批次的致敏明胶颗粒，因为不同批次的致敏明胶颗粒其非凝集状态下的图像可能存在差异。每次实验应使用同一批次的致敏明胶颗粒。
4. 用于PV鉴定的PA检测
<ol>
<li>准备一个微量滴定板。为鉴定一个病毒样本，需要5个孔，另加至少一个阴性对照（致敏颗粒不加病毒和抗体，即下方的第6孔。参见示例中的“无病毒和抗体对照”）。本实验所需的总孔数为5 × 样本数 + 至少一个对照孔。 重要提示： 
实验中至少应设置一个“无病毒和抗体”对照。一管致敏颗粒溶液大约可用于鉴定10个病毒样本。</li>
<li>向微量滴定板中每孔加入12 μL抗PV抗体或GM。板孔排列如下（亦见下方示例）。对于不含抗体的样本（第1孔和第6孔），用12 μL GM代替抗PV抗体。 重要提示： 
若本实验需检测大量PV样本，建议使用多通道移液器或分配器完成此步骤。
<table border="1">
	<tbody>
 	<tr>
 	<td>第1孔</td>
 <td>第2孔</td>
 <td>第3孔</td>
 <td>第4孔</td>
 <td>第5孔</td>
 <td>第6孔</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>GM</td>
 <td>anti-P1+2+3</td>
 <td>anti-P1+2</td>
 <td>anti-P2+3</td>
 <td>ani-P1+3</td>
 <td>GM</td>
 </tr>

 </tbody>
</table>
</li>
<li>向每孔加入12 μL病毒样本。对于不含病毒的样本（第6孔），用12 μL GM代替病毒溶液。 注：病毒样本通常为感染细胞的培养上清液，一般使用L20B细胞或RD细胞。 重要提示： 
若本实验需检测大量PV样本，使用多通道移液器将有助于此步骤。
<table border="1">
	<tbody>
 	<tr>
 	<td>第1孔</td>
 <td>第2孔</td>
 <td>第3孔</td>
 <td>第4孔</td>
 <td>第5孔</td>
 <td>第6孔</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>病毒样本</td>
 <td>病毒样本</td>
 <td>病毒样本</td>
 <td>病毒样本</td>
 <td>病毒样本</td>
 <td>GM</td>
 </tr>

 </tbody>
</table> 
</li> 
<li>将4 °C保存的复溶致敏颗粒溶液恢复至室温，并轻轻敲击管壁，使颗粒充分悬浮。 重要提示： 在通过轻敲实现颗粒完全悬浮后，应立即向各孔中加入颗粒，避免颗粒沉淀导致溶液不均一。</li>
<li>向所有孔中每孔加入25 μL致敏颗粒。 重要提示： 加入致敏颗粒后，应立即将板置于板式振荡器上进行混匀，以启动样本的均匀反应。因此，建议使用分配器加样，以尽量减少板内各样本之间的加样时间差。</li> 
<li>将微量滴定板置于板式振荡器上，振荡混匀30秒。</li>
<li>将微量滴定板置于室温（15˜30 °C）桌面上的白纸上（便于肉眼观察），静置2小时。 重要提示： 
反应过程中及反应结束后，切勿移动板，以免影响结果观察和拍照。所形成的凝集物不稳定，移动板可能导致其扰动。</li>
<li>拍摄板的照片。 
重要提示： 
照片若仅包含局部视图，将无法为后续结果判读和复核提供充分依据。应拍摄多张照片，完整覆盖所有孔，并聚焦于各孔的凝集图像。</li>
</ol>
5. 结果解读
<ol>
<li>阳性与阴性孔的判定。将样品中的凝集现象与无病毒和无抗体对照（明胶颗粒沉淀，无凝集）进行比较（图1和图2）。若凝集图像明显区别于无病毒和无抗体对照（无凝集，阴性对照），应判定为阳性；若凝集图像与阴性对照相似，则应判定为阴性。对于显示明显但仅为部分凝集的样品，可判定为阳性，但需记录为“阳性（部分凝集）”。</li>
<li>脊髓灰质炎病毒（PV）的鉴定。根据加入抗PV抗体后的阳性与阴性孔结果，判定PV血清型。结果判读原理类似于细胞培养系统中的中和试验（例如，抗P1+2抗体阳性表明样品中含有3型PV）。</li>
</ol>
6. 代表性结果
PA试验中PV鉴定的代表性结果如图1所示。所有PV毒株均导致致敏明胶颗粒发生凝集（无抗体样本）。当存在相应的抗PV抗体时，明胶颗粒出现沉淀（无凝集现象），与无病毒且无抗体对照组（阴性对照）相似（例如，在抗P1+2或抗P3+1抗体存在下，PV1(Sabin)出现该现象）。
<img src="/files/ftp_upload/2824/2824fig1.jpg" alt="显示抗体对不同萨宾株脊髓灰质炎病毒在孔中中和作用的病毒中和试验。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
图1. 通过PA试验鉴定PV。 使用PV1(Sabin)、PV2(Sabin)和PV3(Sabin)病毒液（病毒滴度分别为1.2 × 108 CCID50 / 12 μL、8.2 × 107 CCID50 / 12 μL和3.5 × 107 CCID50 / 12 μL）进行PA试验鉴定。无病毒和无抗体对照显示明胶颗粒沉淀（无凝集，阴性对照）。
<img src="/files/ftp_upload/2824/2824fig2.jpg" alt="病毒凝集试验结果；用于病毒检测的稀释系列示意图，包含阳性/阴性对照。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图2"> 
图2. 阳性与阴性孔的判读。 PV1(Sabin)、PV2(Sabin) 和 PV3(Sabin) 病毒溶液（病毒滴度分别为 2.4 x 108 CCID50 / 25 μL、1.7 x 108 CCID50 / 25 μL 和 7.3 x 107 CCID50 / 25 μL）按 1/20 至 1/320 比例稀释后，取 25 μL 稀释样本在不加抗PV抗体的条件下进行PA试验检测。

<ol><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Polio+Laboratory+Manual+%284th+edition%29+WHO%2FIVB%2F04.10%22">Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10</a>. , 4th Edition, World Health Organization. (2004).</li>
<li>Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+particle+agglutination+method+with+soluble+virus+receptor+for+identification+of+poliovirus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus.</a> J. Clin. Microbiol. 48, 2698-2702 (2010).</li>
<li>Bibb, J. A., Witherell, G., Bernhardt, G., Wimmer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+poliovirus+with+its+cell+surface+binding+site%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Interaction of poliovirus with its cell surface binding site.</a> Virology. 201, 107-115 (1994).</li>
<li>Koike, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+poliovirus+receptor+protein+is+produced+both+as+membrane-bound+and+secreted+forms%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J.+9%22%5BJournal%5D)">The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms.</a> Embo J. 9. , 3217-3224 (1990).</li>
<li>Mendelsohn, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+a+human+poliovirus+receptor+gene+into+mouse+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 83, 7845-7849 (1986).</li>
<li>Mendelsohn, C. L., Wimmer, E., Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+receptor+for+poliovirus%3A+molecular+cloning%2C+nucleotide+sequence%2C+and+expression+of+a+new+member+of+the+immunoglobulin+superfamily%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequence, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily.</a> Cell. 56, 855-865 (1989).</li>
<li>Arita, M., Koike, S., Aoki, J., Horie, H., Nomoto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+poliovirus+with+its+purified+receptor+and+conformational+alteration+in+the+virion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformational alteration in the virion.</a> J. Virol. 72, 3578-3586 (1998).</li>
<li>McDermott, B. M., Rux, A. H., Eisenberg, R. J., Cohen, G. H., Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+binding+affinities+of+poliovirus+for+its+cellular+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Two distinct binding affinities of poliovirus for its cellular receptor.</a> J. Biol. Chem. 275, 23089-23096 (2000).</li>
<li>Pipkin, P. A., Wood, D. J., Racaniello, V. R., Minor, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+L+cells+expressing+the+human+poliovirus+receptor+for+the+specific+detection+of+polioviruses+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterisation of L cells expressing the human poliovirus receptor for the specific detection of polioviruses in vitro.</a> J. Virol. Methods. 41, 333-340 (1993).</li>
<li>Avoort, H. G. vander <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+five+methods+for+intratypic+differentiation+of+polioviruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative study of five methods for intratypic differentiation of polioviruses.</a> J. Clin. Microbiol. 33, 2562-2566 (1995).</li>
<li>Kilpatrick, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+group-%2C+serotype-%2C+and+vaccine+strain-specific+identification+of+poliovirus+isolates+by+real-time+reverse+transcription-PCR+using+degenerate+primers+and+probes+containing+deoxyinosine+residues%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid group-, serotype-, and vaccine strain-specific identification of poliovirus isolates by real-time reverse transcription-PCR using degenerate primers and probes containing deoxyinosine residues.</a> J. Clin. Microbiol. 47, 1939-1941 (2009).</li>
</ol>

Souji Masujima 是富士生物公司新产品设计部门的员工。

本PA检测法的独特之处在于使用PVR分子而非抗PV抗体来检测PV 2。这使得致敏的明胶颗粒与PV之间发生特异性相互作用，并且对PV的三种血清型均具有均一的亲和力3-6。我们采用PVR的免疫黏附素形式（PVR-IgG2a）对明胶颗粒进行致敏，因为单体形式的PVR与病毒颗粒上的单一结合位点之间的亲和力仅为中等水平（解离常数为10-7˜-8 M）7, 8，而使用PVR-IgG2a致敏后，我们成功观察到致敏明胶颗粒与PV分离株之间发生特异性凝集。由于致敏颗粒具有高特异性和均一的亲和力，PA检测法中PV鉴定的关键因素包括：1）病毒滴度（决定PA检测法能否有效检出PV）和2）凝集反应的判读（决定PV鉴定的准确性）。
通常，脊髓灰质炎病毒（PV）分离株在细胞培养系统中的病毒滴度范围为 106 至 108 CCID50 / 50 μL。PA 检测法（形成完全凝集）对 1 型、2 型和 3 型 PV 的检测限分别为 1.5×106 CCID<sub...

<table><tbody><tr><td>致敏明胶颗粒</td><td>Fujirebio Inc.</td><td></td><td>检测试剂盒</td></tr><tr><td>重悬缓冲液</td><td>Fujirebio Inc.</td><td></td><td>检测试剂盒</td></tr><tr><td>微量滴定板</td><td>Fujirebio Inc.</td><td></td><td>检测试剂盒</td></tr><tr><td>抗PV抗体</td><td>RIVM</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

颗粒凝集法用于脊髓灰质炎病毒鉴定

Particle Agglutination Method for Poliovirus Identification

在全球消灭脊髓灰质炎行动中，实验室诊断通过从急性弛缓性麻痹（AFP）病例的粪便样本中分离和鉴定脊髓灰质炎病毒（PV），发挥着关键作用。在世界卫生组织（WHO）全球脊髓灰质炎实验室网络中，目前分别采用细胞培养系统和实时逆转录聚合酶链式反应（real-time RT-PCR）进行PV的分离和鉴定。在PV被消灭后的时代，简单且快速的鉴定方法将有助于各国实验室对脊髓灰质炎病例进行迅速确认。在本研究中，我们将介绍一种用于PV鉴定的新型PA检测方法。该PA检测利用PV受体（PVR）分子与病毒颗粒之间的特异性且对所有PV血清型均具一致亲和力的相互作用。该方法操作简便（在反应板中一步完成）、快速（反应后2小时内即可获得结果），且结果可通过肉眼观察（观察明胶颗粒的凝集现象）。

一种利用病毒受体分子的新型颗粒凝集（PA）检测方法 recently developed，可实现对脊髓灰质炎病毒（PV）的快速、简便鉴定。本文将介绍用于PV鉴定的PA检测的操作步骤。

在全球脊髓灰质炎根除行动中，实验室诊断通过从急性...患者的粪便样本中分离和鉴定脊髓灰质炎病毒（PV），发挥着关键作用。

以下实验方案的总体目标是通过一种简单的方法快速鉴定脊髓灰质炎病毒分离株。在本检测中，我们使用致敏明胶颗粒，其表面包被有嵌合分子，该分子包含与IgG2 Fc段连接的人脊髓灰质炎病毒受体的胞外域。由于这些颗粒对所有血清型的脊髓灰质炎病毒分离株均具有均一的亲和力，因此当与含有人脊髓灰质炎病毒的样本共孵育时，颗粒会发生凝集反应。然而，如果样本中存在能够识别特定病毒的抗体，则会发生中和反应，并阻止此实验系统中的凝集现象，从而可在单步反应中快速鉴定脊髓灰质炎病毒分离株。与传统的中和试验等现有方法相比，该技术的主要优势在于操作和结果判读的简便性，旨在减少工作量并缩短获得结果所需的时间。为重悬抗PV1、PV2和PV3抗体，需向每支小瓶中加入0.5毫升水。然后将每种抗体溶液分别转移至含有 4.5 毫升维持培养基的独立试管中。某些批次的抗 PV 抗体以重悬形式提供，对于这些批次的抗 PV 抗体，无需添加水进行重悬。接下来，在新的标记管中制备总体积为3.6毫升的抗体混合溶液，各抗体按1:1比例混合。例如，将1.8毫升抗PV一型抗体与1.8毫升抗PV二型抗体混合。为制备抗PV一型加PV二型的组合抗体，需对所有可能的两两组合重复此操作；同时，通过将每种抗血清各取1.2毫升混合，制备包含三种抗体类型的混合溶液。当四种混合物制备完成后，每种抗体溶液中均含有 720 微升 FCS。这有助于在检测过程中减少抗体对明胶颗粒的非特异性凝集。抗体混合物可在 -20 摄氏度下保存，直至用于凝集试验。在本实验中，我们使用冻干的明胶颗粒，这些颗粒包被了人脊髓灰质炎病毒受体的胞外结构域以及小鼠Fc结构域的IgG二聚体。为确保凝集图像的一致性，务必在同一次实验中使用同一批次的颗粒，避免使用不同批次。每瓶颗粒加入1.5毫升复溶缓冲液进行复溶，轻轻振荡以充分混匀。重悬的颗粒可在 4 摄氏度保存长达两周。首先，在 96 孔微孔板中设计实验。每个样本的第一孔仅含有病毒。第2至第5孔将分别加入病毒和四种混合抗体溶液中的一种。务必保留一个孔作为阴性对照，仅加入培养基，不加病毒或抗体。待培养板设置完毕后，向第2至第5行的每个孔中加入12 µL相应的抗体溶液，以及12 µL的生长培养基。将培养基加入仅含病毒的孔中，即第一行的孔，以及第六行的阴性对照孔。接着，在前五行的每个孔中加入12微升病毒样本，在第六行的阴性对照孔中加入12微升培养基。在抗体和病毒加样完成后，轻轻敲击使重组的明胶颗粒重悬，并立即向所有孔中每孔加入25微升颗粒悬液。在将颗粒转移至孔板之前，必须注意防止颗粒沉降，以确保每个孔中的颗粒量相等。将检测板置于板式混匀器上，混匀30秒。然后将板放置在一张白纸上，于室温下孵育2小时，以使凝集反应发生。在孵育期间或孵育结束后，切勿移动反应板，因为形成的凝集物不稳定。反应完成后，应拍摄多张反应板照片，以清晰显示各孔中凝集现象的质量。在未发生凝集的孔中，如图左侧所示，有色明胶颗粒会沉淀于孔底；而在发生凝集的孔中则不会出现此现象。由于病毒与pvr、IgG二A包被的明胶颗粒之间的相互作用，呈现出如图中央所示的弥散着色模式。在本实验中，我们检测了病毒溶液PV一、二、三在抗体存在下诱导凝集的能力。如图所示，当无病毒或抗体时，不发生凝集，明胶颗粒发生沉淀；相反，在含有病毒但无抗体的孔中则出现凝集。由于病毒的相互作用，发生了凝集现象。在实验孔中，PVR IgG 覆盖的明胶颗粒会阻止能够特异性中和该病毒的抗体所在孔中的病毒凝集。例如，含有抗 PV 1 型抗体的孔可阻止 1 型脊髓灰质炎病毒的凝集，而仅含有抗 PV 2 型和抗 PV 3 型抗体的孔则无法阻止其凝集。脊髓灰质炎病毒2型和3型的情况也是如此。如果操作得当，掌握该技术后可在短短三小时内完成。

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Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

脊髓灰质炎病毒识别粒子凝集法

甲型流感病毒的基因组由八个独立的RNA和蛋白质复合物组成，称为病毒核糖核蛋白复合物（vRNPs）。本文介绍了甲型流感病毒vRNPs的甘油梯度纯化及其透射电子显微镜观察方法。...

甲型流感病毒核糖核蛋白复合物的纯化与可视化

本文介绍了一种简单、定量的液相亲和捕获检测方法。该技术基于磁珠与带标签蛋白（如纳米抗体）之间的相互作用，以及带标签蛋白与另一种标记蛋白（如脊髓灰质炎病毒）之间的亲和力，是一种可靠的检测手段。...

一种利用磁珠进行液相结合捕获分析研究蛋白质-蛋白质相互作用的方法：以脊髓灰质炎病毒-纳米抗体为例

在本视频中，我们演示了一种称为病毒样颗粒捕获实验的免疫沉淀检测方法，用于从样本中分离展示抗原的病毒样颗粒（VLP）。抗原与结合在磁珠上的特异性抗体结合，形成固定的抗原-抗体复合物，随后将其分离并保存，以用于进一步分析。...

病毒样颗粒捕获实验：利用中和抗体偶联磁珠从样本中分离展示抗原的病毒样颗粒的方法

本视频展示了基于成像的微量中和试验，用于分析甲型与乙型流感病毒之间的抗原关系。该方法可定量且直观地评估抗体或其他治疗方法在预防病毒感染方面的有效性。...

使用基于图像的微量中和试验分析病毒间的抗原关系

通过结合原子力显微镜与生物淘选技术，我们建立了一套针对任意生物样本中疾病特异性蛋白质变体（即使浓度较低）的阴性和阳性生物淘选系统，成功获得了针对肌萎缩侧索硬化症相关TDP-43蛋白变体的抗体。...

基于新型原子力显微镜生物筛选技术分离肌萎缩侧索硬化中TDP-43变异体形态特异性试剂

我们提供了一种从腺病毒（Ad）感染的人类细胞中分离病毒复制区室（RC）的新策略。该方法代表了一种无细胞体系，有助于阐明调控病毒基因组复制与表达的分子机制，以及在复制区室处建立的病毒-宿主相互作用的调控机制。...

从腺病毒感染的正常人细胞中分离富含病毒复制区室的核内组分

采用打印的聚糖微阵列策略，将传统的96孔板检测方法微型化，用于分析甲型流感病毒血凝素对含唾液酸受体的结合强度和特异性。...

一种用于评估甲型流感病毒血凝素亲和力与特异性的微型化聚糖微阵列检测方法

本文介绍了一种用于分离感染性变形虫的单细胞微吸吮方法。为了分离感染了福斯托病毒（Faustoviruses）及未知巨型病毒的Vermamoeba...

单细胞微吸法作为荧光激活细胞分选的替代策略用于巨型病毒混合物的分离

本文介绍了一种用于检测抗原展示型病毒样颗粒（VLPs）上中和表位的实验方案。利用与蛋白G偶联磁珠结合的包膜糖蛋白特异性单克隆抗体，对来源于人类免疫缺陷病毒（HIV）的VLPs进行免疫沉淀。捕获的VLPs随后通过SDS-PAGE分离，并使用针对病毒核心蛋白Gag的特异性抗体进行Western印迹分析。...

利用捕获法检测基于病毒样颗粒（VLP）疫苗中抗原的中和敏感性表位

本文描述了一种全面的实验室方案和分析流程，用于快速、经济且简便的比色法细胞检测，以检测针对AAV6的中和成分。...

使用比色法细胞检测技术检测抗AAV中和抗体的逐步操作方法

本文描述了一种利用优化的肝素亲和层析方法制备和纯化腺相关病毒载体的详细方案。该方法简单、可放大且成本低廉，无需超速离心步骤。所获得的病毒载体具有高纯度和高生物活性，适用于临床前研究。...

通过单步半自动化肝素亲和层析方案分离腺相关病毒载体

学习使用粒子凝集法快速识别脊髓灰质炎病毒。该方法利用包被嵌合分子的明胶颗粒，通过一步反应检测所有血清型，简化操作流程并显著缩短检测时间，提高病毒学诊断效率。

颗粒凝集法用于脊髓灰质炎病毒鉴定

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