从肿瘤制备类器官：一种三维体外肿瘤模型

将肿瘤组织切碎成小块。将组织块转移至含有消化缓冲液的离心管中。细胞周围的胶原纤维被降解，从而破坏组织的基质。随后，离心收集消化后的组织碎片，并弃去大部分消化缓冲液。轻弹离心管以充分重悬沉淀。

此时溶液中含有大小不一的细胞团块。将细胞团块重悬于含有胰蛋白酶和ROCK抑制剂的溶液中。胰蛋白酶持续消化肿瘤组织，而抑制剂可防止细胞死亡。每隔一定时间，用移液器吹打溶液以破碎细胞团块并分散细胞。随后，将细胞重悬于适当浓度的基质溶液中。

将溶液滴加到培养板中，形成基质穹顶。将培养板倒置放入培养箱中，使基质完全凝固。随后加入细胞培养基，正置培养。该基质可作为支架，支持类器官的三维生长。

剪碎后，将肿瘤组织块放入含有消化缓冲液的15毫升离心管中，在37摄氏度下消化1.5至2小时。消化结束后，通过离心沉淀消化后的组织，并弃去上清液。

轻弹管壁以松动细胞沉淀。在37摄氏度下，用1毫升预热的含10微摩尔Y-27632 ROCK抑制剂的胰蛋白酶溶液重悬细胞，孵育5分钟。

孵育结束时，使用标准的 P1000 移液器吸头将组织悬液吹打 5 次。将离心管放回水浴中，继续孵育 5 分钟，并进行吹打处理。

进行基质穹顶铺板时，用9毫升冷培养基洗涤消化后的细胞，然后通过离心收集细胞。将细胞重悬于1毫升新鲜培养基中进行计数，计数后再次通过离心收集细胞。将肿瘤细胞用适当体积的基质稀释。

将200微升基质细胞溶液小心地滴加到预热至55摄氏度的6孔板的每个孔中。室温下静置2分钟，使凝胶形成圆顶状并凝固，然后将板倒置于37摄氏度培养箱中孵育20分钟。

当类器官凝胶完全凝固后，向每孔加入2毫升添加了雄激素R1881和ROCK抑制剂的前列腺类器官培养基。将培养板放回细胞培养箱中。