活体小鼠肝脏灌注：通过门静脉向啮齿类动物肝脏灌注溶液的方法

在对啮齿类动物进行麻醉和准备后，找到门静脉并在其下方穿入一根缝线。在门静脉周围打一个松结，不要拉紧。此结可在后续实验步骤中稳定静脉注射导管。

将静脉留置针的针尖斜面向上，并与门静脉平行，插入静脉管腔——即静脉内部的空间。回撤针芯，将导管沿静脉一直推进至肝脏内的静脉分支区域。

固定导管后，提高蠕动泵的流速。随着血液被灌注液取代，肝脏应立即变得苍白。剪开一条主要血管，以排出更多的血液和灌注液。

挤压切断的血管数次，使肝脏膨胀，确保肝脏内完全无血液残留。切换泵的方向，使其向肝脏灌注缓冲液。最后，再次短暂地进行肝脏膨胀操作，注意避免因过度膨胀导致肝脏结缔组织破裂。

放置门静脉导管时，首先使用镊子背面将小鼠腹腔内的肠管移至右侧，暴露门静脉，然后用弯头镊子在肝脏与胰十二指肠上静脉之间的门静脉下方穿过一段20厘米长的聚酯缝合线。

用镊子小心地将线拉到动物的另一侧，使其位于门静脉下方居中位置，并在门静脉周围打一个松散的单结。将弯镊置于静脉下方，轻柔地将所有组织向尾部方向牵拉，以拉直静脉。

接下来，将导管针的斜面朝上，并与镊子附近的门静脉下部平行，轻轻用针头穿刺血管。当斜面进入血管腔后，回撤弹簧式针芯，继续将聚合物导管沿血管推进，直至斜面接近静脉分支区域。

在导管周围打结固定后，立即将蠕动泵设置为 4 毫升/分钟，并将管路的雄性接头连接到导管的雌性接头，此时应开始观察到肝脏变白。剪开腹主动脉以引流。使用医用胶带将管路固定在垫巾上。

使用剪刀垂直剪开腹部皮肤，以利于血液和灌注液的排出。然后，用直镊子轻轻挤压流出的血管数次，使肝脏膨胀，确保所有血液完全排出，并用 PBS 灌注肝脏，直至肝组织变白。