功能化纳米颗粒靶向卵巢癌：一种促进叶酸偶联纳米颗粒造影剂被卵巢癌细胞摄取的技术

叶酸受体是由大多数卵巢癌细胞过表达的膜相关糖蛋白。利用这些受体可实现将诊断用纳米颗粒靶向递送至癌细胞。

从所需叶酸封端的纳米颗粒对比剂偶联物的悬液开始。将该纳米颗粒悬液加入贴壁培养的卵巢癌细胞中。在所需时间内孵育培养物。

纳米颗粒上功能化的叶酸有助于识别癌细胞表面表达的叶酸受体，促进纳米颗粒偶联物与细胞的选择性结合。随后，细胞膜发生内陷，促进纳米颗粒的细胞摄取和积累。

收集癌细胞。接着，离心以分离细胞与含有未结合纳米颗粒的上清液。弃去上清液，并将携带纳米颗粒的细胞重悬于适当的缓冲液中，用于后续实验应用。

首先，将叶酸封端的硫化铜纳米颗粒以适当浓度溶于新鲜的RPMI培养基中。将该纳米颗粒溶液加入含有SKOV-3细胞的24孔板各孔中，终浓度为每毫升400微克。在37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育两小时。

随后，用 0.5 毫升 0.25% 胰蛋白酶和 EDTA 对细胞进行消化。为中和胰蛋白酶，加入至少 1 毫升无叶酸的 RPMI 1640 完全培养基，并在 123 × g 条件下离心 6 分钟。洗涤细胞时，吸去上清液。

将细胞重悬于 2 毫升 PBS 中，于 123 × g 离心 6 分钟。重复洗涤步骤两次，以去除未结合的纳米颗粒。

然后，用1至2毫升含2% Tween的PBS溶液重悬细胞。使用血细胞计数板和台盼蓝对细胞进行计数。将细胞用2% Tween的PBS溶液稀释至选定的检测浓度。