建立用于成像质谱分析的卵巢癌通讯模型：一种鉴定转移性卵巢肿瘤发展中小分子化学信使的方法

来自输卵管的致瘤细胞会刺激健康的卵巢细胞产生促进肿瘤转移的化学信号分子或小分子。为了观察这些化学信号分子，首先将一个井式分隔器组装在合适的玻璃载片上。将塑料分隔条以对角线方向置于井内，将井分成两个大小相等的区域。将含有输卵管肿瘤细胞的液体琼脂糖悬液加入井的一个区域中。冷却后，琼脂糖凝固并形成三维网络结构，使肿瘤细胞被固定其中。

移除隔板，将健康的卵巢组织置于空腔中央。用液态琼脂糖混合物覆盖，待琼脂糖凝固后，使卵巢组织嵌入并靠近癌细胞。按所需时间进行孵育。肿瘤细胞和健康卵巢细胞均会释放小分子，这些分子通过琼脂糖网络向邻近细胞扩散。

移除小室隔板。干燥共培养体系，使琼脂脱水并变平，同时将释放的小分子截留在基质中。使用成像质谱或IMS对小分子的分布进行可视化分析。

将8孔分隔器置于经ITO处理的载玻片上方，并将塑料分隔条斜向插入各孔中。按照之前的方法制备细胞培养物，取100微升细胞悬液与100微升液化琼脂糖于2毫升离心管中混合。立即吸取150微升细胞-琼脂糖混合液，加至分隔器的一侧，同时对分隔器保持向下的压力。

让琼脂糖冷却并凝固约1分钟，然后移除分隔器。用镊子将卵巢外植体放置在孔的空半部分中央。在卵巢上方加入150微升细胞琼脂糖混合物。将载玻片置于37摄氏度、5%二氧化碳的湿润培养箱中孵育。

四天后，从琼脂糖凝胶块中移除腔室分隔器。用扁平的刮铲将琼脂糖凝胶边缘从腔室壁上分离，并轻轻向上提起腔室。若任何琼脂糖凝胶块发生移动，请轻轻将其复位，确保彼此之间不相互接触。

将载玻片置于37摄氏度的烘箱中约四小时，每隔一小时旋转90度，以确保样品受热均匀。载玻片必须完全干燥，否则可能导致样品在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF）的高真空环境中发生爆炸。

干燥载玻片并监测其进程是获得高空间分辨率和高质量质谱的关键步骤。如果出现碎片脱落或过度皱缩现象，我们不建议采集质谱数据。

根据基质喷雾仪设定的参数，将基质溶液喷涂至载玻片上。若使用磷红作为校准物，取1微升磷红加至载玻片上的清晰区域。若使用肽混合物作为校准物，则在帕拉菲姆膜上按1:1比例将其与基质混合以促进离子化，并点样0.5至1微升至载玻片上。待校准物完全干燥后，再进行质谱成像数据采集。