从实体标本中获取原代卵巢癌细胞:一种从卵巢肿瘤标本中培养上皮性卵巢癌细胞的方法

存在于卵巢外表面的上皮细胞可能会恶性转化为癌细胞，从而生长成卵巢肿瘤。

要分离这些上皮性卵巢癌细胞或 EOC，首先取卵巢肿瘤标本并将其切成小块。将切碎的碎片转移到含有补充有所需蛋白酶的消化缓冲液的管中。

这些蛋白酶降解组织内的细胞外基质蛋白，将 EOC 细胞、红细胞和一些解离的成纤维细胞释放到悬浮液中。

通过过滤器过滤细胞浆液，将悬浮的单细胞与未解离的组织片段分离。离心悬浮液以沉淀 EOC 细胞、红细胞和成纤维细胞。丢弃含酶的上清液。

细胞沉淀重悬于上皮生长培养基中，并将其转移到培养皿中。孵育培养物，使 EOC 细胞和成纤维细胞附着在培养皿的底部，而红细胞漂浮在培养基中。

通过刷新培养基去除悬浮的红细胞。随着时间的推移，该培养基促进 EOC 细胞在成纤维细胞上的选择性生长，形成原发性卵巢癌细胞的单层。

从手术室收集样本并将其放在冰上运输到实验室。仍在运输的容器内，将样品放入生物安全罩中。将样品从 50 毫升锥形管转移到含有 10 毫升新鲜冰冷 PBS 的 60 毫米 x 60 毫米培养皿上。

接下来，使用无菌剃须刀片，将样品进一步切成 2 毫米或更小的碎片。然后，在15毫升锥形管中用分散酶II处理DMEM。将切碎的组织转移到DMEM分散酶II混合物管中。然后，将样品在 5% 二氧化碳和 37 摄氏度下孵育 30 分钟。每五分钟手动搅拌一次细胞浆料，以确保最佳消化。

孵育后，通过放置在 50 毫升锥形管顶部的 70 微米网状细胞过滤器转移细胞浆液。使用注射器柱塞轻轻地对网施加压力。丢弃残留在网状物顶部的任何未解离的组织，并将获得的细胞悬液收集在 50 毫升无菌锥形管中。

接下来，将锥形管在 320 x g 在 4 摄氏度下离心 7 分钟。弃去上清液并将细胞沉淀重悬于含有 10% FBS 和 1% PS 的 10 毫升 DMEM 中。然后，将细胞悬液转移到培养皿中，并将悬浮液在5%二氧化碳和37摄氏度下孵育。在初始铺板后 24 小时更换培养基，以去除细胞碎片和培养物中存在的大部分红细胞。

最后，在接下来的两周内每三天更换一次培养基，之后原代EOC细胞的培养物就可以用于下游应用。

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.