卵窗法：一种打开受精鸡卵壳以暴露绒毛尿囊膜血管的方法

在受精的鸡蛋中，绒毛尿囊膜（CAM）是位于内层蛋壳膜下方的高度血管化的组织层，其功能是支持胚胎发育。

为了观察完全发育的尿囊绒毛膜（CAM），首先将一枚照蛋仪（一种高亮度光源）紧贴蛋壳，以观察蛋内结构。找到位于外蛋壳膜与内蛋壳膜之间的气室，以及蛋内明显的分支状血管系统，并在蛋壳外部标记其位置。

在这些位置，于蛋壳上制作微小的圆形孔洞，以暴露下方的白色壳膜。在两处位置轻轻刺穿暴露的膜，注意不要破坏绒毛尿囊膜（CAM），也不要引起蛋白或血液泄漏。

保持卵的纵向位置，对自然气室开口施加吸力，以抽出内部空气。由此产生的负压使绒毛尿囊膜降至第二个孔口下方，从而在血管网络上方形成一个人工气室。

勾画出移位的气室轮廓。在轮廓内侧几厘米处切割蛋壳，注意不要破坏气室与绒毛尿囊膜（CAM）的边界。移除切开的蛋壳部分，形成一个较大的窗口，暴露下方的绒毛尿囊膜及其血管系统。对于有活性的鸡蛋，使用透明薄膜密封窗口。

在发育第7天或第8天，当绒毛尿囊膜（CAM）完全发育后，关闭卵转器，并将约1至3枚卵放入生物安全柜中的卵架内。关闭灯光后，将照卵灯紧贴一枚卵的卵壳，以识别并标记该卵气室的位置。随后，移动照卵灯沿卵壳寻找较大的血管网络，必要时旋转卵以调整位置。

理想的血管系统应位于蛋的中部附近分支。使用记号笔描出将用于植入的血管系统。在重新打开超净台的光源后，使用装有碳化硅磨石的无线旋转工具，在气室中心正上方的蛋壳上钻一个小孔。当大部分蛋壳已被去除，但白色内膜仍保持完整时，按照刚刚演示的方法，在将要打开血管窗的位置再钻另一个小孔。当第二个孔准备就绪后，使用18号针头轻轻刺破气室及血管系统上方的白色内膜，注意仅破坏白色内膜，而绒毛尿囊膜（CAM）在整个钻孔区域内不得受损。

再次关闭通风橱灯，使用照蛋器确认气室已从蛋的末端转移至血管网络上方区域。如有必要，将连接于移液控制器的真空管插入原气室上方的孔洞，并以短促的轻柔抽吸移动气室。标记新气室位置的轮廓，该位置约在气室-绒毛尿囊膜（air-CAM）边界内侧 0.5 厘米处，并贴上一块刚好能覆盖新气室上方孔洞的封箱胶带。

按照上述方法制备另外两个蛋后，将蛋放回培养箱，并按上述方法每次打开1至3个额外的蛋用于实验。当所有蛋均打开后，将1至3个气室已移位的蛋转移至生物安全柜内的蛋架上，使用装有圆形切割轮的无线旋转工具，在不破坏绒毛尿囊膜（CAM）或血管系统的情况下，沿气室边界完全穿透蛋壳切割出一条细小切线。使用弯头剪刀沿剩余的气室边缘剪开，形成蛋壳窗口，并确认胚胎的存活状态。

存活的胚胎将表现出丰富的血管网络、透明的蛋白、胚胎运动和/或可见的心跳。在非存活胚胎中，绒毛尿囊膜（CAM）可能呈现不透明状，血管稀少甚至缺失，且胚胎可能体积较小或完全缺失，无运动或心跳。使用Semken镊子从无菌棉球上取下小块棉花，轻轻擦拭存活胚胎的CAM表面，以去除任何壳粉和碎屑。然后，用一块6厘米×7厘米透明薄膜敷料的四分之一大小覆盖蛋壳开口，注意不要触碰CAM，并将鸡蛋放回孵育箱中，使开口朝上。对于容易滚动的鸡蛋，可使用蛋架的一部分、蛋旋转器的边缘或其他合适物品将其固定。