基于鸡胚尿囊绒毛膜的癌症建模：一种研究癌细胞致瘤性与转移的鸡胚内模型

鸡的绒毛尿囊膜（CAM）是一种高度血管化的膜，存在于鸡等某些脊椎动物的卵内。这种胚外膜紧贴于无血管的壳膜内侧，是胚胎与外界环境之间进行氧气和二氧化碳气体交换的场所。

为了建立CAM肿瘤模型，首先准备一枚具有完整发育的CAM且蛋壳部分打开的活性受精鸡胚，暴露其分支状血管系统。确认CAM已与蛋壳膜分离。

将一个无菌的防粘环置于血管分支点上。使用玻璃棒在环内轻轻摩擦膜组织，刮除其外层上皮，暴露下方带有血管系统的中胚层。将预冷的癌细胞悬液与合适的细胞外基质混合后，用移液器加入环内。该环可限制细胞的扩散。

让基质凝固以固定细胞。封闭蛋壳开口，并在适当条件下孵育鸡蛋。中胚层内丰富的血管系统为癌细胞提供氧气和必需营养物质，从而为其生长和扩增提供适宜的微环境。

为制备用于移植的癌细胞悬液，从目标癌细胞培养物中收获细胞，并通过离心沉淀细胞。吸除上清液后，用残留的培养基将细胞机械重悬。将细胞悬液置于冰上，使用移液器测量培养基中的细胞体积。随后，将细胞重悬于20至100微升培养基中，使细胞浓度为每20至100微升含100万至200万个细胞，培养基中添加2.7至4毫克/毫升的细胞外基质以及所需的各种生长因子或其他添加剂。

进行癌细胞植入时，使用防粘环将最多6枚待植入的鸡蛋放置在蛋架上，并将透明薄膜敷料的边缘向开口处卷起，以去除蛋壳上的薄膜。检查鸡蛋是否具有活性且健康。理想的鸡蛋在开口区域的中央会有一条主血管及分支较细的血管网络。

使用弯头虹膜镊，将无菌非粘性环置于血管上方的CAM上，理想位置为分支点处。用无菌玻璃搅拌棒轻轻擦伤CAM，并将癌细胞悬液滴加至环的中心。待所有细胞接种完毕后，用一块四分之一大小的6厘米×7厘米透明薄膜敷料封闭开口，并在蛋壳上标记相应的移植编号。随后，将鸡蛋稳妥地放回培养箱中，确保蛋壳开口朝上。