0 次观看 • 3:55 分钟 • April 30th, 2023
癌细胞的三维类器官培养物可重现人类癌症的多种病理生理特征。因此，这些体外培养模型为癌症研究提供了优秀的实验平台。
处理这些类器官时，首先使用在合适的基底膜基质中培养形成的3D类器官培养物。加入适量的细胞回收培养基并进行孵育。该培养基可促进基质凝胶的解聚，从而将3D类器官释放到溶液中。
离心该混合物以沉淀类器官。含有基质成分的回收培养基保留在上清液中。弃去上清液。接下来，向类器官沉淀中加入多聚甲醛溶液。该化学物质进入类器官细胞并与氨基酸结合，引起蛋白质交联，从而实现样本固定。此步骤对于任何后续组织学应用均至关重要。
将类器官离心成团，以分离并去除含有多聚甲醛的上清液。向类器官中加入温热融化的琼脂糖。用针头将离心成团的类器官从沉淀中解离并分散到液态琼脂糖中。让琼脂糖凝固，包埋类器官。将含有类器官的琼脂糖块用于后续组织学检测。
为进行组织学处理，从孔中移除现有培养基，注意避免吸出基底膜凝胶滴。加入等体积的细胞回收溶液，并在4摄氏度条件下孵育平板60分钟。
孵育结束后，用移液器松动基底膜穹顶，并用移液器吸头将其压碎。收集解离的穹顶结构及细胞回收液至一个1.5毫升离心管中。在300 × g、4摄氏度条件下离心5分钟，随后吸除上清液并保留备用。
在确认类器官存在之前的最后一步之前，保留所有上清液。加入所需体积的冷PBS，轻轻吹打混匀，通过机械方式使沉淀物脱离，同时不破坏类器官。重复离心并移除上清液。
用等体积的4%多聚甲醛在室温下固定沉淀物60分钟。固定后，重复离心步骤并用PBS洗涤。然后，缓慢加入200微升预热的2%琼脂糖，并立即使用连接在1毫升注射器上的25号针头轻轻将细胞沉淀从管壁上完整剥离，注意不要破坏沉淀。
对于琼脂糖沉淀法，在使用25号针头加入琼脂糖后，必须立即从管壁上脱离细胞沉淀。
待琼脂糖完全凝固后，用连接在1毫升注射器上的25号针头将其从管中分离，并转移至新的1.5毫升离心管中。加入70%乙醇充满管内，随后按照常规组织脱水与石蜡包埋方案进行操作。