前列腺类器官检测：一种基于基质凝胶环的体外培养技术用于研究前列腺上皮细胞的分化能力

前列腺上皮主要由基底上皮细胞和腔面上皮细胞组成。单层基底细胞构成腺体的外层，支持腔面细胞的存活；而腔面细胞则排列于腺腔内表面，分泌前列腺特异性蛋白。

为了在体外研究前列腺上皮细胞的分化，首先准备基底前列腺上皮细胞的悬浮液。将该悬浮液按所需比例与预冷的基底膜基质混合。用移液器将此混合物加至防细胞黏附培养板孔内壁底部边缘处。轻轻旋转培养板，使混合物在孔的周边形成环状结构。

将培养板孵育，使基质凝固。使用选定的培养基补充培养体系。培养基中的生长因子可支持基底上皮细胞的增殖。同时，培养皿的抗细胞黏附特性可防止细胞贴壁，促使细胞在基质内形成三维球状结构。

随着时间推移，球状体发育出由多层上皮包围的腔隙。腔壁的基底上皮细胞最终分化为分泌型腔面细胞，形成三维腺体结构。

按照文本方案所述，首先制备小鼠前列腺基底细胞和腔内上皮细胞。用500微升小鼠类器官培养基洗涤细胞沉淀。然后将沉淀重悬，使细胞密度为每微升1,000个细胞。为配制主混合液，将悬浮于小鼠类器官培养基中的上皮细胞与基质凝胶混合，得到终浓度为25%细胞悬液和75%基质凝胶的混合物。根据后续实验应用的不同，基底细胞通常以每80微升80微升含100至2,000个细胞的浓度接种，而腔内细胞则通常以每80微升含2,000至10,000个细胞的浓度接种。

对于每种细胞混合物，向24孔板的每个孔中加入80微升基质凝胶。用移液器将液滴加至孔壁下半部分，避免与聚HEMA涂层直接接触。加入基质凝胶后，轻轻旋转培养板，使基质凝胶与细胞的混合物在孔边缘形成环状。将24孔板正向置于37摄氏度、5% CO2培养箱中，孵育10分钟，使基质凝胶部分凝固。

孵育10分钟后，将24孔板倒置，继续孵育50分钟，使基质凝胶完全凝固。随后，以滴加方式向每孔中心加入350微升预热的小鼠类器官培养基。加完培养基后，将24孔板放回培养箱中。

为小鼠类器官培养基补充培养基时，将24孔板倾斜45度角，使用P1000移液器从每孔中心轻轻吸出原有培养基，注意避免触碰基质胶环。按先前方法加入350 µL预热的小鼠类器官培养基。建议对培养超过五天的类器官添加更大体积的培养基，以防止关键营养物质和生长因子迅速耗尽。