蛋白裂解物提取：一种裂解类器官以收集细胞蛋白的技术

细胞裂解液，即含有裂解细胞内容物的液体，可用于蛋白质提取和分析等下游实验流程。对这些组分的研究能够揭示细胞特性与功能的相关信息。

为制备类器官蛋白裂解液，首先准备在理想的基底膜基质中培养的类器官。移除培养皿中的废弃培养基，加入含有蛋白酶的预热培养基覆盖基质，反复吹打以使基质从培养皿上脱落。

孵育混合物。培养基中的蛋白酶会降解基质，将类器官释放到溶液中。离心样品，以分离类器官和含有酶的上清液。

将类器官沉淀重悬于适当的蛋白裂解缓冲液中。孵育样品。缓冲液中的去垢剂会破坏类器官的 细胞膜，使胞内成分释放到溶液中。同时，缓冲液中的蛋白酶抑制剂可使释放出的蛋白酶和磷酸酶失活，防止其底物蛋白发生降解。

随后，超声处理混合物以彻底破坏细胞。核膜破裂，将核蛋白释放到溶液中。超声波还可剪切释放出的核酸，防止其污染蛋白裂解液。

收集类器官时，使用移液器将1毫升预热的含dispase培养基反复吹打基质胶，直接喷射到基质胶环上，直至整个胶环完全脱落。将脱落的基质胶与类器官混合物转移至1.5毫升微量离心管中。按照文本方案所述完成消化后，向类器官沉淀中加入磷酸盐缓冲液，并通过轻弹管壁重新悬浮。

将类器官在室温下以800 ×g离心5分钟，形成沉淀，并使用微量移液器吸除上清液。根据每10 µL紧实细胞体积加入100 µL蛋白裂解缓冲液，重悬类器官沉淀。轻弹管壁以充分重悬。随后进行超声处理：将离心管浸入湿冰中，将超声破碎仪的探针轻轻接触微型离心管外壁，于20 kHz条件下超声处理40秒，之后按照既定方案进行Western blot分析。